[发明专利]ckmb在毕赤酵母中的表达和制备

权利要求书

1.m基因和b基因在同一载体中串联表达载体和工程菌的构建方法，包括如下步骤： 

1)编码ckm亚基的基因克隆到pPICZα上的EcoRI和NotI之间，构建以AXO1为启动子α因子为分泌信号的重组质粒，命名为pPICZαA-ckm； 

2)编码ckb亚基的基因克隆到pPICZα上的EcoRI和NotI之间，构建以AXO1为启动子α因子为分泌信号的重组质粒，命名为pPICZαA-ckb； 

3)以BamH1和Bgl II双切pPICZαA-ckb，凝胶回收表达框，命名为AOX1-ckb； 

4)将表达框AOX1-ckb克隆到pPICZαA-ckm的BamH1； 

5)筛选ckm和ckb同一方向串联表达的重组质粒，命名为pPICZαA-ckm-ckb； 

6)重组质粒pPICZαA-ckm-ckb转化毕赤酵母GS115，用不同浓度G418筛选出不同拷贝重组质粒的毕赤酵母GS115，筛选出表达量最高的一株命名为pPICZαA-ckm-ckb。 

2.ckmb在毕赤酵母中的表达和高效制备方法，其步骤包括： 

构建含有权利要求1的表达载体和工程菌；培养含有表达载体的工程菌，诱导表达和分离纯化ckmb。 

3.按照权利要求2所述的方法，其特征在于，所述ckmb的分离纯化包括以下步骤： 

浓缩，硫酸铵分级沉淀，phenyl疏水层析和Q离子交换。 

4.按照权利要求2、3所制备的ckmb在体外诊断试剂方面的应用。