[发明专利]SPA-抗体三聚体作为检验血液抗原的指示剂的用途

说明书

本发明是名称为“SPA-抗体三聚体、含有该三聚体的细胞处理试剂盒及其制备方法和用途”（申请号201010022753.4、申请日2010年01月13日）的发明专利分案申请专利。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，特别是涉及葡萄球菌A蛋白（staphylococalprotein A，以下简称SPA）-抗体三聚体作为检验血液抗原的指示剂的用途。

技术背景

SPA能与人及多种哺乳动物血清IgG分子中的Fc片段结合。结合的亲和性次序依次是猪、狗、兔、人、猴、鼠、小鼠及牛。SPA除与IgG结合外，还能与血清中少量的IgM和IgA结合，SPA菌对各类免疫球蛋白的吸附率：IgG为90%～98%，IgM为2%～30%，IgA为1.5%～20%。

出现共沉反应的SPA与IgG必须有两个结合部位，它们分别在Fc和Fab段上,缺一虽能与SPA结合，但不出现共沉反应，这种Fab的参与并非SPA－抗体反应。现已研究表明，IgG与SPA的结合部位是CH₂和CH₃的交界处。

SPA应用很广，但所有应用的原理都离不开SPA具有与IgG的Fc段的结合能力，主要应用方面如下：

1.SPA菌的协同凝集作用

用已知的标准血清，吸附到SPA菌的表面,使之成为吸附抗体的载体,再以此去诊断相应的未知抗原而产生肉眼可见的凝集颗粒,诊断的抗原可以是颗粒性的,也可以是可溶性的。此种凝集相当于反向间接血凝,但省去间接血凝中的抗体纯化,红血球鞣化等复杂手续,而只需要SPA菌体及粗制免疫血清即可。所以此法简单、快速,特异性敏感性均较满意。

2.作为广谱第二抗体

用SPA代替抗体IgG的第二抗体，有如下优点：①SPA制备容易，性质稳定，易纯化，对人和多种哺乳动物的IgG都能应用,不受种属限制。②SPA的结合力强，相当于游离抗体与抗原的结合力，对人和兔的亲和常数均为10³L/克分子，结合后对IgG的活性无影响。无论在0℃、37℃、44℃及56℃几乎均能立即结合而无需长时间的孵育，因此可以缩短试验时间；③SPA容易标上¹²⁵I、荧光素、辣根过氧化物酶、铁蛋白等，因此可与多种技术相结合；④SPA分子高度均一，它不是免疫球蛋白，不受Fc受体影响，所以有较高的抗IgG特异性。

3.用于提取纯化IgG利用SPA与IgG的结合特性提取IgG，比常规采用硫酸铵、Sephadex柱，DEAE柱或免疫梯度离心等法要简便得多，而且纯度好。

4.检测和提纯IgM IgM在病毒的早期诊断中具有重要意义，为了检测特异性IgM抗体，必须首先在血清中除去IgG。采用SPA菌吸附IgG是目前快速而又理想的办法，利用此法也为IgM的提纯开辟了道路。

5.其它方面用于免疫复合物的检测、体外激活补体功能试验、细胞表面标记以及肿瘤表面抗原的检测等。

干细胞（stem cell)是指具有无限或较长期的自我更新能力，并能分化出至少一种高度分化子代细胞的细胞。根据细胞来源将干细胞分成胚胎性干细胞和成体干细胞，而成体干细胞包括自体干细胞和异体干细胞。

目前国内外的最新进展促使“骨髓干细胞”移植血管新生的作用机理、机体内环境对干细胞疗效的影响以及转基因骨髓源干细胞的作用进行进一步的研究，以提高干细胞的治疗效果。

临床上的治疗过程中主要采集骨髓或外周血来源的单个核细胞进行移植，并认为其中的CD34+或CD133＋/VEGF-R2+细胞为血管新生的干/祖细胞，但这类细胞的增殖分化功能、他们的归巢到血管损伤部位的能力以及达到治疗效果的有效数量等都是尚未充分了解的内容。

表面抗原（Lineage surface antigen）是当干细胞分化为各系的祖细胞和成熟细胞时，会出现各系的专一性标志，如淋巴系CD19/CD7/粒细胞系CD13、CD11、CD15、CD16,红细胞系的CD47、CD51、CD71,巨核细胞系的CD31/CD41/CD42/CD61/CD63/CD107，T/NK系的CD2/CD25/CD7,这些在特定类型的血细胞表面出现的抗原通称为系表面抗原，Lin抗原阳性就可以确定为祖细胞和成熟细胞，还有许多Lin抗原阴性的细胞称之为原始干细胞，如CD34/CD133/SCA-1/CD38等等。我们可以根据各科室不同要求去除相关的成熟细胞系。