[发明专利]用于刑侦目的的使用液相色谱-串联质谱检测生物样品中地芬诺酯的方法

说明书

技术领域

本发明属于刑事侦查中的化学物质分析检测领域，特别涉及用于刑侦目的的使用液相色谱-串联质谱检测生物样品中地芬诺酯的方法。

背景技术

地芬诺酯为临床常见的止泻药，近年来常因为用药不当而中毒，尤其是在10岁以下儿童人群中中毒发生频率极高。除此之外，地芬诺酯常被吸毒人员作为海洛因的替代品大量使用而引起滥用中毒，因此，对地芬诺酯的检测十分有必要。现有技术的地芬诺酯检测中，检测灵敏度低、操作较复杂，由此使得检测难度增大；而刑事侦查中针对吸毒嫌疑人的尿液样品或血液样品检测，要求检测灵敏度高、操作简单，能够快速而准确地给出检测结果。

发明内容

针对现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一种检测灵敏度高、操作简单的使用液相色谱-串联质谱检测尿液中地芬诺酯的方法，使得本发明的方法能够用于刑侦目的，快速而准确地给出检测结果。

本发明的技术方案是这样实现的：用于刑侦目的的使用液相色谱-串联质谱检测生物样品中地芬诺酯的方法，包括以下步骤：

(I)从生物样品中萃取地芬诺酯；

(II)利用液相色谱-串联质谱联用仪检测步骤(1)中萃取到的地芬诺酯。上述用于刑侦目的的使用液相色谱-串联质谱检测生物样品中地芬诺酯的方法，液相色谱条件为：a)色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18柱，2.1mm×50mm，1.7μm；b)流动相由A相和B相组成：A相为：乙腈，B相为：pH为3.5的5mmol/L甲酸铵水溶液；c)梯度洗脱条件：初始时A相与B相体积比为1∶9，1.5分钟时A相与B相体积比为6∶4，1.8分钟时A相与B相体积比为6∶4，2.0分钟时A相与B相体积比为1∶9，3.5分钟时A相与B相体积比为1∶9；d)柱温：35℃；e)流速：0.6mL/分钟。此色谱条件下分离效果较好，峰形对称性好，基线稳定，并且峰形尖锐。

上述用于刑侦目的的使用液相色谱-串联质谱检测生物样品中地芬诺酯的方法，质谱条件：a)离子源：电喷雾电离；b)检测方式：正离子；c)毛细管电压：2.8kV；d)源温度：150℃；e)雾化气流速：1000L/h；f)扫描模式：多反应离子监测。

上述用于刑侦目的的使用液相色谱-串联质谱检测生物样品中地芬诺酯的方法，所述生物样品为血、尿或肝，从血、尿或肝中萃取地芬诺酯包括如下步骤：

(1)生物样品预处理：血、尿或肝剪碎后加入乙腈，在旋涡振荡器上混旋，然后加入甲酸水溶液或盐酸，在旋涡振荡器上混旋，离心，上清液待过柱；优选使用甲酸水溶液，与盐酸相比，加入甲酸溶液能够使生物样品中的地芬诺酯更好地吸附在混合型阳离子交换萃取柱上；并且甲酸溶液能够使生物样品中的蛋白沉淀完全，离心分离后的上清液中蛋白含量极小，不会影响后续检测的可靠性和准确性。

(2)柱活化：取混合型阳离子交换萃取柱，依次以甲醇、水活化；

(3)过柱：将步骤(1)中得到的上清液过柱；

(4)淋洗：依次用水、甲醇和乙腈淋洗；

(5)洗脱：用氨水-乙腈溶液、甲醇-氨水溶液或三氯甲烷-异丙醇-氨水溶液洗脱，收集洗脱液；优选使用氨水-乙腈溶液作为洗脱液：当氨水与乙腈的体积比为8∶92时，地芬诺酯的回收率最高为98％(n＝6)，精密度RSD＜4.3％(n＝6)；甲醇-氨水溶液作为洗脱液时：地芬诺酯的回收率最高为70％【此时甲醇与氨水的体积比为95∶5】(n＝6)，精密度RSD＜2.3％(n＝6)；三氯甲烷-异丙醇-氨水溶液作为洗脱液时：地芬诺酯的回收率最高为80％【此时三氯甲烷、异丙醇和氨水三者的体积比为78∶30∶2】(n＝6)，精密度RSD＜3.1％(n＝6)。

(6)过滤定容：洗脱液过有机微孔滤膜，滤液浓缩至干，残渣用乙腈溶解，利用液相色谱-串联质谱联用仪进行分析检测。

上述用于刑侦目的的使用液相色谱-串联质谱检测生物样品中地芬诺酯的方法，所述生物样品为血、尿或肝，从血、尿或肝中萃取地芬诺酯包括如下步骤：

(1)生物样品预处理：1mL血、1mL尿或1g肝剪碎后加入600μl乙腈，在旋涡振荡器上混旋5分钟以上，然后加入甲酸体积分数为2％的甲酸水溶液4mL，在旋涡振荡器上混旋5分钟以上，离心，上清液待过柱；

(2)柱活化：取混合型阳离子交换萃取柱，依次以2mL甲醇、2mL水活化；(3)过柱：将步骤(1)中得到的上清液过柱，流速0.5mL/min～1.0mL/min；

(4)淋洗：依次用4mL水、4mL甲醇和4mL乙腈淋洗；