[发明专利]快速分离乙型溶血性链球菌的方法

权利要求书

1.快速分离乙型溶血性链球菌的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）取1 mg扫帚分子溶解于2 mL 0.02 M pH 6.5磷酸缓冲液PBS，加入0.6 mg N-羟基丁二酰亚胺NHSS，0.4 mg 乙基3-（3-二甲氨基）碳二亚胺盐酸盐EDC，室温置于混匀仪上搅拌，活化15 min；取11.5 mg SHβ特异性抗体加入上述反应液中，室温置于混匀仪上搅拌30 min；减压旋干溶剂，去离子水溶解，在PBS和去离子水中透析1 d；透析结束将得到的溶液冷冻干燥得扫帚分子-抗体复合物；（2）取15 mg 长链生物素，3.6 mg NHSS，2.4 mg EDC溶解于2 mL 0.02 M pH 6.5 PBS缓冲液中；加入0.55 mg扫帚分子-抗体复合物，室温置于混匀仪上搅拌30 min；减压旋干溶剂，去离子水溶解，在PBS和去离子水中透析1 d；透析结束将得到的溶液冷冻干燥得长链生物素-扫帚分子-抗体复合物；（3）取1 mL待测样品溶液，加入0.1 mg SHβ抗体和长链生物素共修饰的扫帚分子即步骤（2）长链生物素-扫帚分子-抗体复合物，置于混匀仪上，以30 rpm的转速室温孵育15 min；加入0.1 mg修饰有链霉亲和素的纳米磁珠，置于混匀仪上，以30 rpm的转速再室温孵育15 min，常规磁力架分离3 min；（4）磁分离后，用0.1% PBST洗涤，用PBS缓冲液重悬即得捕获有乙型溶血性链球菌的纳米磁珠-链霉亲和素-长链生物素-扫帚分子-抗体-SHβ抗原复合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述扫帚分子为氨基化的线性化聚酰胺-胺，其分子量为13000 Da。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述修饰了链霉亲和素的纳米磁珠粒径为20-50 nm，优选为30 nm。