[发明专利]肺炎链球菌在复杂基质中的分离方法

权利要求书

1.肺炎链球菌在复杂基质中的分离方法，其特征在于包括以下步骤：（1）取3.6 mg树枝状聚合物溶解于2 mL 0.02 M，pH 6.5磷酸缓冲液PBS，加入0.6 mg N-羟基丁二酰亚胺NHSS，0.4 mg 乙基3-（3-二甲氨基）碳二亚胺盐酸盐EDC，室温置于混匀仪上搅拌，活化15 min；加入10.5 mg SP特异性抗体，室温置于混匀仪上搅拌30 min；真空干燥后，去离子水溶解，在PBS和去离子水中透析1 d；透析结束将得到的溶液冷冻干燥得树枝状聚合物-抗体复合物；（2）取15 mg 长链生物素，3.6 mg NHSS，2.4 mg EDC溶解于2 mL 0.02 M pH 6.5 PBS缓冲液中；加入0.55 mg树枝状聚合物-抗体复合物，室温置于混匀仪上搅拌30 min；真空干燥后，去离子水溶解，在PBS和去离子水中透析1 d；透析结束将得到的溶液冷冻干燥得长链生物素-树枝状聚合物-抗体复合物；（3）取1 mL待测样品溶液，加入0.1 mg 的长链生物素-树枝状聚合物-抗体复合物于上述离心管中，置于混匀仪上，以30 rpm的转速室温孵育15 min；加入0.1 mg修饰有链霉亲和素的纳米磁珠，置于混匀仪上，以30 rpm的转速室温孵育15 min；常规磁力架分离3 min；（4）磁分离后，用0.1% PBST洗涤后，用PBS缓冲液重悬即得到富集有SP的纳米磁珠-链霉亲和素-长链生物素-树枝状聚合物-抗体-SP抗原复合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述树枝状聚合物为氨基化的聚酰胺-胺型树枝状聚合物，其分子量为42000 Da。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述修饰了链霉亲和素的纳米磁珠粒径为20-50 nm，优选为30 nm。