[发明专利]快速分离铜绿假单胞菌的方法

权利要求书

1.快速分离铜绿假单胞菌的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）每取0.55 mg树状分子 PAMAM G4溶解于2 mL 0.02 M，pH 6.5磷酸缓冲液PBS，加入0.6 mg N-羟基丁二酰亚胺NHSS，0.4 mg 乙基3-（3-二甲氨基）碳二亚胺盐酸盐EDC，室温置于混匀仪上搅拌，活化15 min；加入6 mg 铜绿假单胞菌特异性抗体，室温置于混匀仪上搅拌30 min；减压旋干溶剂，去离子水溶解，在PBS和去离子水中透析1 d；透析结束将得到的溶液冷冻干燥得到树状分子-抗体复合物；（2）取15 mg 长链生物素，3.6 mg NHSS，2.4 mg EDC溶解于2 mL 0.02 M pH 6.5 PBS缓冲液中；加入0.55 mg树状分子-抗体复合物，室温置于混匀仪上搅拌30 min；减压旋干溶剂，去离子水溶解，在PBS和去离子水中透析1 d；透析结束将得到的溶液冷冻干燥得长链生物素-树状分子-抗体复合物；（3）取1 mL待测样品，加入0.1 mg铜绿假单胞菌抗体和长链生物素共修饰的树状分子即步骤（2）长链生物素-树状分子-抗体复合物，置于混匀仪上，以30 rpm的转速室温孵育15 min；加入0.1 mg修饰有链霉亲和素的纳米磁珠，置于混匀仪上，以30 rpm的转速室温孵育15 min，常规磁力架分离3 min；（4）磁分离后，去离子水轻轻清洗，用PBS缓冲液重悬即得富集有铜绿假单胞菌的磁珠纳米磁珠-链霉亲和素-长链生物素-树状分子-抗体-铜绿假单胞菌抗原复合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述树状分子为氨基化的聚酰胺-胺型树枝状高分子PAMAM-G4，其分子量为14215 Da。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述修饰有链霉亲和素的纳米磁珠粒径为20-50nm，优选为30 nm。