[发明专利]谷类第4组主要致敏原的DNA序列和重组制品

说明书

本申请是申请目为2004年12月1日，申请号为200480037231.4(国际申请号为PCT/EP2004/013664)，发明名称为“谷类第4组主要致敏原的DNA序列和重组制品”的发明专利申请的分案申请。

发明背景

本发明涉及到来自谷类(小麦族(Triticeae))的第4组主要致敏原的DNA序列的提供，本发明也包括具有降低过敏作用的片段、部分序列的新组合及含有点突变的突变体。重组的DNA分子和其衍生而来的多肽、片段、部分序列的新组合和变异体可以被用于花粉过敏性疾病的治疗。由重组方法制备的蛋白可以用于花粉过敏的体外和体内诊断。

I型过敏反应是全球性的，在工业国家中有多至20％的人口患有如过敏性鼻炎、结膜炎或支气管哮喘。这些过敏由从各种来源如植物花粉、螨类、猫和狗释放到空气中的致敏原(空气致敏原)引起，多至40％的I型过敏患者有对禾本花粉致敏原的特异性IgE反应，对谷类花粉致敏原尤甚(Freidhoff et al.，1986，J.Allergy Clin.Immunol.78，1190-2001)，在谷类花粉致敏原中，又以黑麦致敏原为最重要。

触发I型过敏反应的物质为蛋白、糖蛋白或多肽，通过粘膜被摄取后，在已被致敏的个体体内这些致敏原与结合于肥大细胞表面的IgE分子反应，如果两个IgE分子通过致敏原相互交叉连接，即会导致效应细胞释放介质(如组胺、前列腺素)和细胞因子，并引起相应的临床症状。

根据各种致敏原与过敏患者的IgE反应的相对频率，将致敏原区分为主要致敏原和次要致敏原。

禾本科(Poaceae)来源的各种花粉被划分为不同组，各组之间相互同源。

特别值得一提的是主要致敏原第4组中的分子相互间具有很强的交叉免疫反应，对鼠单克隆抗体和人IgE抗体均如此(Fahlbusch et1993Clin.Exp.Allergy23：51-60；Leduc-Brodard et1996，J.Allergy Clin.Immunol.98：1065-1072；Su et1996，J.Allergy Clin.Immunol.97：210；et1998，Clin.Exp.Allergy28：799-807；Gavrovic-et2000，10(6)：361-367；Stumvoll et al.2002，Biol.Chem.383：1383-1396；Grote et2002，Chem.383：1441-1445；Andersson und Lidholm，2003，Arch.Allergy Immunol.130：87-107；Mari，Clin.Exp.Allergy，33(1)：43-51)。

迄今为止，尚没有一个第4组主要致敏原的完整DNA序列被弄清楚。

迄今第4组致敏原中的鸭茅(Dactylus glomerata)致敏原只可能通过酶消化获得多肽并进行序列测定：

DIYNYMEPYVSK(SEQ ID NO13)，

VDPTDYFGNEQ(SEQ ID NO14)，

ARTAWVDSGAQLGELSY(SEQ ID NO15)

和GVLFNIQYVNYWFAP(SEQ NO16，Leduc-Brodard et J.Allergy Clin.Immunol.98：1065-1072)。

通过蛋白水解获得肽并测定了序列的还有致敏原第4组中的亚热带狗牙根(Cynodon dactylon)：

KTVKPLYIITP(SEQ ID NO17)

KQVERDFLTSLTKDIPQLYLKS(SEQ ID NO18)

TVKPLYIITPITAAMI(SEQ ID NO19)

LRKYGTAADNVIDAKVVDAQGRLL(SEQ ID NO20)

KWQTVAPALPDPNM(SEQ ID NO21)

VTWIE SVPYIPMGDK(SEQ ID NO22)

GTVRDLLXRTSNIKAFGKY(SEQ ID NO23)

TSNIKAFGKYKSDYVLEPIPKKS(SEQ ID NO24)