[发明专利]一种测定养血清脑有效成分的方法

权利要求书

1.一种测定养血清脑有效成分的方法，其特征在于步骤如下：

（1）样品处理：取血浆样品1-3体积，加入0.2-2体积酸溶液和0.2-1体积内标溶液，涡旋混合；之后加入10-50体积有机溶剂涡旋混合进行液液萃取；上述混合液离心后取有机溶剂层，吹干，然后用1-2体积液相流动相复溶后离心，取上清液进样测定，其中流动相含50%-90%A相；

（2）采用液质联用仪进行测定：

其中液相部分色谱条件：采用反相c18或c8硅胶色谱柱作为分离介质，进样后梯度洗脱，其中，流动相A0.02-5%甲酸、乙酸或水，B乙腈或甲醇；梯度洗脱条件：

0-2.5min10%B、90%A；

2.51-5min100%B；

5.1-20min10%B、90%A；

流速；0.1-0.4ml/min；柱温15-40℃；

质谱检测条件：负离子检测模式；喷雾电压：-2500—-3500v；毛细管温度：250-400℃；鞘气：N25-25psi；辅助气：N21-15arb；碰撞气体压力：Ar1.5mTorr；

扫描时间：0.1-1s；

采用选择反应监测模式：

原儿茶酸离子对m/z153→109或153→91CE=10-30v;

绿原酸m/z353→191或353→85CE=10-40v;

咖啡酸m/z179→135或179→108CE=10-45v；

阿魏酸m/z193→134或193→178CE=5-30v；

迷迭香酸m/z359→161或359→197或133CE=10-50V；

芍药苷m/z525→449或525→121CE=10-30V；

氯霉素m/z321→152CE=10-40V。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于其中，步骤1中所述的酸溶液选自，盐酸，0.1-10%的甲酸或0.01-0.2%的磷酸，优选1%的甲酸或0.05%的磷酸；步骤1中所述的内标溶液是：丹参素、酮洛芬、氯霉素、弗比洛芬中的一种；步骤2中所述的有机溶剂为：乙酸乙酯，二氯甲烷或3：1体积比的三氯甲烷与正己烷的混合溶剂。

3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤如下：

（1）样品处理：取血浆样品1-3体积，加入0.2-2体积0.05-5mol/L浓度的盐酸溶液和0.2-1体积100-300ng/ml浓度的丹参素、酮洛芬、氯霉素或弗比洛芬溶液适量，涡旋混合；之后加入10-50体积乙酸乙酯，二氯甲烷或3：1体积比的三氯甲烷与正己烷的混合溶剂涡旋混合进行液液萃取；上述混合液在3000-7000r/min下离心后取有机层，在30-55℃水浴下氮气吹干，然后用1-2体积液相流动相复溶后离心，取上清液进样测定，其中流动相含60%-80%A相；

（2）采用液质联用仪进行测定：

液相分离：液质联用仪的液相部分采用反相c18硅胶色谱柱为作为分离介质，进样后梯度洗脱；

流动相A0.02-5%甲酸水，B乙腈或甲醇，梯度洗脱条件：0-2.5min10%B、90%A；2.51-5min100%B；5.1-20min10%B、90%A；流速：0.1-0.4ml/min；柱温15-40℃。

质谱检测：负离子检测模式；喷雾电压：-2500—-3500v；毛细管温度：250-400℃；鞘气：N25-25psi；辅助气：N21-15arb；碰撞气体压力：Ar1.5mTorr；

扫描时间：0.1-1s；

采用选择反应监测模式：

原儿茶酸离子对m/z153→109或153→91CE=10-30v;

绿原酸m/z353→191或353→85CE=10-40v;

咖啡酸m/z179→135或179→108CE=10-45v；

阿魏酸m/z193→134或193→178CE=5-30v；

迷迭香酸m/z359→161或359→197或133CE=10-50V；

芍药苷m/z525→449或525→121CE=10-30V；

氯霉素m/z321→152CE=10-40V。