[发明专利]展示保护性抗原的细菌菌蜕及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种展示保护性抗原的细菌菌蜕及其应用。

背景技术

细菌菌蜕(bacterial ghost,BG)是一种最新发展起来的生物传递系统。细菌菌蜕是革兰阴性细菌被噬菌体phiX174的裂解基因E裂解后形成的完整细菌空壳，其形成是通过对裂解基因E的严格表达调控实现的。BG的形成主要依赖于裂解蛋白E在细胞膜上

的跨膜孔道作用，胞内的细胞质和核酸成分在渗透压的作用下经跨膜孔道被排出，形成一个只含有细胞膜结构的空细菌体。BG兼顾了组合抗原免疫原性、佐剂效应、靶向性载体的作用，既能携带外源抗原,又能同时递送核酸和其他药物，特别适合于粘膜免疫、口服免疫及滴鼻免疫，并适宜大规模生产。同时，由于菌蜕缺乏遗传物质，消除了耐药基因或毒力岛基因的水平转移等引起的潜在危害。因此，细菌菌蜕正在应用于新型疫苗的研究与开发。

手足口病（Hand-food-and-mouth disease）是由肠道类病毒（主要为肠道病毒71型和柯萨奇病毒组）引起的全球性传染病，在世界各地均有不同规模的爆发流行，我国自1981年在上海始见本病，以后北京、河北、天津、福建、吉林、山东、湖北、安徽、湖北、广东等十几个省市均有报道。手足口病多发生于5岁以下儿童，报告的病例以婴幼儿为主，可引起手、足、口腔等部位的疱疹，少数患儿可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜炎等并发症，个别重症患儿甚至死亡，已成为世界性的公共卫生问题，引起了广泛重视。为加强手足口病防治工作，我国卫生部将手足口病列入传染病防治法规定的丙类传染病进行管理。目前，在全世界范围内还缺乏有效地抗病毒药物，研制有效的疫苗是控制手足口病感染流行的最有效策略。

肠出血性大肠埃希菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC)是一种重要的病原菌，主要包括O157:H7、O26:H11和O111等数种血清型。E.coli O157:H7感染能引起人的出血性结肠炎(Hemorrhagic colitis，HC)、阑尾炎、食管狭窄和结肠穿孔等严重的胃肠道并发症。10%E.coli O157:H7感染病例，特别是儿童和老年人，还可引起致死性的溶血性尿毒综合征(Haemolytic uraemic syndrome，HUS)等全身性并发症。近年来，E.coli O157:H7的暴发流行在世界各地时有发生，尤其在日本、美国、英国等地。我国江苏、安徽等地1999、2001年也相继发生了E.coli O157:H7感染的暴发流行，患者超过两万人。目前临床对于EHEC感染仍缺乏有效的防治办法，只能给予对症治疗和适当的抗菌治疗。

发明内容

本发明的目的是提供一种展示保护性抗原的细菌菌蜕及其应用。

本发明保护展示保护性抗原或展示含有所述保护性抗原的融合蛋白的细菌菌蜕。

所述保护性抗原可为引起手足口病的病毒的保护性抗原。所述引起手足口病的病毒可为肠道病毒或柯萨奇病毒组，具体可为肠道病毒EV71或柯萨奇B组3型病毒。

所述保护性抗原可为如下（a）或（b）或（c）

（a）由序列表中序列4自N末端第139至435位氨基酸残基组成的蛋白质；

（b）由序列表中序列7自N末端第139至422位氨基酸残基组成的蛋白质；

（c）将（a）或（b）经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与（a）或（b）具有相同功能的由其衍生的蛋白质。

所述“含有所述保护性抗原的融合蛋白”可为如下（e）或（f）或（g）

（e）由序列表中序列4所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

（f）由序列表中序列7所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

（g）将（e）或（f）经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与（e）或（f）具有相同功能的由其衍生的蛋白质。

所述细菌可为革兰氏阴性菌，如大肠杆菌。所述大肠杆菌可为肠出血性大肠杆菌O157:H7，具体可为肠出血性大肠杆菌（EHEC）88321。

所述细菌菌蜕具体可为本发明内容中任一后续方法制备得到的细菌菌蜕。

本发明还保护一种融合蛋白，自N端至C端依次包括如下片段：序列表的序列4自N末端第1至136位氨基酸残基组成的片段甲、保护性抗原、序列表的序列4自N末端第438至560位氨基酸残基组成的片段乙和序列表的序列4第561至652位氨基酸残基组成的片段丙；