[发明专利]一种血浆中功能性蛋白质的分离纯化方法

权利要求书

1.一种血浆中功能性蛋白质的分离纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）向血浆溶液中添加可溶性无机盐Ⅰ和亲水性有机溶剂，搅拌均匀，形成双水相萃取体系，静置后，收集上相萃取液；

（2）步骤（1）的上相萃取液经蒸馏回收溶剂后，过Phenyl Sepharose6FF^TM疏水层析柱，先用平衡液Ⅰ洗脱至无蛋白流出，再用洗脱液Ⅰ梯度洗脱，收集功能性血浆蛋白馏分；

（3）步骤（2）的功能性血浆蛋白馏分经透析得蛋白样品溶液，过Q Sephrose FF或DEAE Sephrose FF离子交换层析柱，先用平衡液Ⅱ洗脱至无蛋白流出，再用洗脱液Ⅱ梯度洗脱，得高纯度血浆功能性蛋白；

其中所述可溶性无机盐Ⅰ为磷酸盐、碳酸盐、硫酸盐、卤化物、柠檬酸盐中的一种或两种以上的混合物；所述亲水性有机溶剂为乙醇、甲醇、正丙醇、异丙醇、异丁醇、乙二醇或丙酮中的一种；所述平衡液Ⅰ含有0.2～3mol/L可溶性无机盐Ⅱ和5～50mmol/L缓冲液；所述洗脱液Ⅰ含有0～1mol/L可溶性无机盐Ⅱ和5～50mmol/L缓冲液；所述平衡液Ⅱ含有5～50mmol/L缓冲液；所述洗脱液Ⅱ含有0～1mol/L可溶性无机盐Ⅱ和5～50mmol/L缓冲液；所述可溶性无机盐Ⅱ为磷酸氢二钾、柠檬酸钠、氯化钠中的一种或两种以上的混合物；所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、巴比妥钠-盐酸缓冲液中的一种。

2.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤（1）中所述可溶性无机盐Ⅰ占双水相体系质量的1%～45%，亲水性有机溶剂占双水相体系质量的3%～50%。

3.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤（1）中所述可溶性无机盐Ⅰ为磷酸氢二钾、磷酸钾、碳酸钠、碳酸钾、氯化钠、硫酸铵、硫酸钠、硫酸钾、柠檬酸钠、柠檬酸钾中的一种或两种以上的混合物。

4.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤（1）中所述静置的时间为0.5～36小时；双水相体系的温度为0～37℃；双水相体系的pH值为3～13。

5.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤（2）所述蒸馏的温度为20～45℃，蒸馏至有机溶剂含量低于20%。

6.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤（2）中所述回收有机溶剂的上相萃取液，加入可溶性无机盐Ⅱ，其在萃取液中的终浓度为0.3～4.0mol/L，调pH至5.5～9.0。

7.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤（2）中所述平衡液Ⅰ或洗脱液Ⅰ的pH值均为5.5～9.0。

8.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤（3）中所述平衡液Ⅱ或洗脱液Ⅱ的pH值均为5.5～9.0。

9.一种如权利要求1-8的任一项所述的方法制备得到的功能性血浆蛋白。

10.根据权利要求9所述的功能性血浆蛋白为白蛋白或免疫球蛋白。