[发明专利]一种从五味子中提取分离五味子乙素的方法

说明书

（一）技术领域

本发明涉及一种从五味子中提取分离五味子乙素的方法。

（二）背景技术

五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis的干燥成熟果实，具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心的功效。五味子中具有联苯环辛二烯结构的木脂素类化合物是其主要的生物活性成分，主要包括五味子乙素、五味子甲素、五味子醇甲等，其中五味子乙素是含量一般在0.1～0.4%之间。近年来研究发现，五味子乙素具有抗肿瘤、保肝、抗溃疡、抗病毒等多种生物活性，并且对清除自由基也有较好效果。因此五味子乙素作为药用原料开发与应用具有重要研究价值。但五味子乙素来源途径较少，主要靠从五味子药材中提取纯化制得，且五味子药材中所得五味子乙素含量较低，结构类似物较为复杂，故研究开发一个可工业化制备分离药用原料五味子乙素的制备工艺具有重要研究价值。

目前，文献报道五味子乙素的提取纯化方法很多，如孟宪军等发表的《用大孔树脂分离纯化五味子乙素》（食品工业科技，2009年6月，第30卷第9期，191-195页），比较了六种不同型号的大孔吸附树脂对五味子乙素的吸附性质，结果表明，AB-8型树脂对五味子乙素具有很好的吸附特性，确定其工艺参数为：上样浓度0.05mg/ml、上样流速为1ml/min、静态吸附时间为4hr，解析流速为0.5ml/min、解析用量为100ml。采用该方法对五味子提取液进行提取纯化，能提高洗脱液中五味子乙素的质量分数，但未能得到高纯度的五味子乙素单体化合物。

已公开专利“从五味子中提取五味子甲素和五味子乙素的方法”（中国，专利号：CN102050707A；公布日：2011.05.11），所述方法可先后洗脱出五味子甲素和五味子乙素，使它们得到分离，其中五味子甲素的含量为0.8～1.2%，五味子乙素的含量为3～4%，但未能得到高纯度的五味子乙素单体化合物。

已公开专利“一种制备高纯度五味子乙素的方法”（中国，专利号：CN101070314A；公布日：2007.11.14），此发明应用分析型高速逆流色谱仪的小量制备及半制备型高速逆流色谱仪的较大量制备，一次分离制得五味子乙素（纯度可达98%以上）。此方法实施需高速逆流色谱仪等专用设备，工业化生产技术难度较大且生产能力有限。

（三）发明内容

本发明目的是提供一种从五味子中提取分离五味子乙素的方法，是应用五味子药材加入钙盐沉淀剂后进行含水乙醇提取,可在提取过程有效去除五味子药材果皮中有机酸及鞣质类化合物的浸出，降低药材醇提浓缩液对大孔吸附树脂的不可逆污染。后续步骤采用大孔吸附树脂柱层析、硅胶柱层析和重结晶方法从五味子药材中提取分离得到高纯度的五味子乙素，符合工业化生产的技术特点。

本发明采用的技术方案是：

一种从五味子中提取分离五味子乙素的方法，所述方法如下：

（1）药材提取：取五味子药材，粉碎，加入10～15%（w/ｗ，钙盐沉淀剂占五味子药材的质量百分比）钙盐沉淀剂，加80～95%（v/v）乙醇水溶液于50～80℃下浸提，或回流搅拌提取2～3次，乙醇水溶液用量为每次4～10mL/g五味子，每次提取2～4hr，合并醇提液，减压回收溶剂，得五味子醇提浓缩液（1g生药/ml）；所述钙盐沉淀剂为下列之一:氧化钙，氢氧化钙；

（2）大孔吸附树脂柱层析：取五味子醇提浓缩液，滤过，上样于大孔吸附树脂柱（1BV=500mL）（树脂装柱之前通常需要按常规方法进行预处理），加50～60%乙醇水溶液洗脱3～5个柱体积，加75～85%乙醇水溶液洗脱6～10个柱体积，合并含有五味子乙素的流分（TLC检识（硅胶，PE:EtOAc（20:5），UV254nm）），减压回收溶剂至干，加入适量正己烷溶解（以将五味子乙素全部溶解为宜），放置1～3天，抽滤，得五味子乙素粗品，滤余液为五味子乙素结晶母液；所述大孔吸附树脂为下列之一：AB-8、NKA、HPD100、X5、HPD300；

（3）硅胶柱层析：取步骤（2）五味子乙素结晶母液，上样于硅胶层析柱，加洗脱剂洗脱6～10个柱体积，合并含有五味子乙素的流分，减压回收溶剂至干，加入适量正己烷溶解，放置1～3天，抽滤，得五味子乙素粗品；所述洗脱剂为体积比97:3～90:10的石油醚-乙酸乙酯或正己烷-乙酸乙酯二元溶剂系统；

（4）乙醇重结晶：合并步骤（2）和（3）所得五味子乙素粗品，加6～10倍量无水乙醇溶解，抽滤，滤液放置1～3天，抽滤，干燥，得五味子乙素。

优选的，步骤（2）所用大孔吸附树脂为AB-8型大孔吸附树脂。