[发明专利]快速检测尿液C肽的胶体金免疫层析试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及检测尿液C肽的快速检测试剂盒及胶体金免疫层析测试法，具体地说是一种应用竞争抑制原理的胶体金免疫层析法实现对尿液中C肽进行定量检测的方法。

背景技术

食物摄入过多、消耗少、能量正平衡可能导致许多代谢性紊乱或疾病，如肥胖、2型糖尿病、多种心血管疾病（如动脉粥样硬化、高血压，冠心病等）、脂肪肝，心血管疾病等等，是当前人们极其关心的健康议题。目前在中国，已有超过50%的中国人有超重和体重过多的担忧，逾30％的人肥胖，有近10-20%的中国人罹患由此而来的代谢紊乱或疾病，如隐性糖尿病、2型糖尿病等。这些人得到医学治疗或医疗帮助的不多，除非他们有很严重的代谢性紊乱、晚期糖尿病或其并发症。其余的则通常不寻求医学咨询或医疗协助。

基础胰岛素水平升高是这些代谢性紊乱或疾病的重要原因。采取措施控制基础胰岛素水平，如增加运动和控制饮食等，可能能降低罹患这类代谢紊乱或疾病的风险。测试基础胰岛素水平，可以评估罹患上述疾病的风险。因此，动态监检测基础胰岛素水平，可以预知自身的健康状况。很有必要发明一种家用或诊所用动态监测装置，能方便地检测基础胰岛素水平。然而，胰岛素稳定性低、半衰期短，直接测量体液（包括血液，尿液等）中的胰岛素水平非常困难。C肽和胰岛素是胰岛β-细胞分泌的胰岛素原降解的产品。C肽与胰岛素是等摩尔量从胰腺分泌释放入血。而且，C肽在尿液中比胰岛素要稳定得多。因此，测定和分析C肽比胰岛素更准确。目前，通常测量人血液样本或24小时的尿液样本中的C肽，来评估胰岛β-细胞功能。送检样本通常被送往正规实验室，需几天后才可返回结果。显然，需要一个更快更方便的方法来跟踪检测基础C肽水平。胶体金免疫层析法已被广泛用来检测人体小分子和各类蛋白，如检测50纳克/毫升的肉毒杆菌神经毒素、0.68纳克/毫升的绒毛膜肾上腺素和0.1纳克/毫升的降钙素原。

发明内容

为解决背景技术中提到的方便测试基础胰岛素水平的方法需求，本发明提供了一种简单、可靠、成本低廉、灵敏度高的快速检测尿液C肽的胶体金免疫层析试剂盒及其检测方法。

为了达到本发明的目的，本发明技术方案如下：一种快速检测尿液C肽的胶体金免疫层析试剂盒，包括长方体状盒体、位于盒体内底部的长条形黏贴支架，在黏贴支架上方从左到右依次黏贴有样本垫、金结合物垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；在硝酸纤维素膜上中间部位从左到右设有一道检测线和一道控制线；其特点是：所述的样本垫材质为玻璃纤维膜，经过主要含Tris、酪蛋白钠盐、PVP-10的处理液进行处理过夜；所述的金结合物垫是由经过含Tris、S-17、牛血清白蛋白等的专用处理液处理过的玻璃纤维膜构成，含有胶体金抗C肽抗体交联物；所述的硝酸纤维素膜上的检测线为包被有固相化的C肽抗原的T线，T线包被的固相化的C肽量高于样本中能与金结合物垫中胶体金交联抗体的C肽量。所述的硝酸纤维素膜上的控制线为包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体的C线。

一种快速检测尿液C肽的胶体金免疫层析检测方法，其特点是：被检测样本为尿液，采用上述快速检测尿液C肽的胶体金免疫层析试剂盒，被检测样本为尿液，采用上述权利要求1至2任意一项所述的快速检测尿液C肽的胶体金免疫层析试剂盒；1）用加油枪加100ul或用滴定管加3滴尿液样本到样本垫上。或者手持检测端，垂直把样本垫至刻度处浸入尿液样本中1秒钟；2）平放静置2-15分钟；3）2分钟后，进行定性或半定量检测，对比试剂盒附带的比色卡，估计尿液C肽含量范围；4）或者等待15分钟，使用专用的定量读数仪，进行定量检测尿液样本的C肽浓度。

本发明运用胶体金标记鼠单克隆抗C肽单克隆抗体，以竞争抑制法这一技术来实现对尿液中C肽的定量检测。该方法用于测定尿液C肽以评估过夜饥饿后的基础胰岛素水平；该方法也可被用于测定血液中C肽含量。正常人尿液中基础C肽水平低于1.8纳克/毫升，胶体金免疫层析法适应于检测正常人尿液中基础C肽水平；本发明是一种家用或诊所用动态监测装置，能方便地检测尿液C肽水平。其检测灵敏度达到0.25 ng/ml水平；填补了国内外空白。本发明成本低、使用方便、灵敏度高、检测时间短，可以快速检测尿液C肽的浓度。

附图说明

图1是本发明快速检测尿液C肽的胶体金免疫层析试剂盒的结构示意图。

图2是本发明的0-4纳克/毫升C肽的比色卡的标准测试颜色。

具体实施方式