[发明专利]含油体蛋白与胶原蛋白融合蛋白的油体

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及拟南芥油体蛋白与重组胶原蛋白融合蛋白及含该融合蛋白的油体。

背景技术

胶原是生物体内一种纤维蛋白，主要存在于皮肤、骨、软骨及肌腱等组织中，占人体或其他动物体总蛋白含量的25%~33%。胶原蛋白因其优良的生物学特性而广泛地应用于生物医用材料领域。因此，如何进行高纯度、高产率的提取具有生物活性的胶原蛋白一直是广大研究者关注的课题。胶原蛋白的类型较多，已经发现有26种，分布于皮肤、肌腱等组织中，其中，皮肤中约85%的胶原蛋白属于IV型，IV型胶原是含量最多研究最透彻的胶原，占生物体胶原总量的90%左右。IV型胶原一般为白色、透明、无分支的原纤维，是由两条相同的α1(IV)链和一条α2(IV)链组成的异质胶原(Heterotypic Collagen)。α1(IV)和α2(IV)肽链的螺旋区含有338个(Gly-X-Y)重复序列，X常为脯氨酸，Y常为羟脯氨酸或羟赖氨酸。因此，甘氨酸约占1/3，脯氨酸和羟脯氨酸占1/5以上，还有大量的羟赖氨酸和丙氨酸。α链中吡咯环的存在使N-C键不能自由旋转，构成左手螺旋，螺距为0.87 nm，每转一圈约有3.3个氨基酸残基。三条α链依靠侧链残基相连，最小氨基酸甘氨酸残基位于三股螺旋内侧，螺距为96nm，每圈有36个氨基酸残基，形成了原胶原(tropo collagen)分子特有的三股螺旋结构。

胶原蛋白在很多方面都具有生物学功能，包括：（1）胶原蛋白能保护皮肤，提高皮肤的弹性，胶原蛋白在调节表皮更新再生中发挥重要的作用，胶原蛋白可促进细胞粘附和细胞增殖；（2）胶原蛋白具有止血性能；（3）胶原蛋白具有很低的免疫原性；（4）胶原蛋白作为细胞生长的依附和支架物，能诱导上皮细胞等增殖、分化和移行；（5）胶原蛋白由三螺旋结构的胶原纤维构成。作为细胞外基质的骨架，具有易吸收、易同化等特点，因此具有良好的生物相容性。

胶原蛋白结构和功能特点的多样性和复杂性，决定了其在许多领域的重要地位以及良好的应用前景。

（一）在食品方面的应用

胶原蛋白本身就可以作为一种食品，食用胶原蛋白一般来源于动物的真皮、肌腱和骨胶原，其外观通常为白色，口感柔和，味道清淡，易消化。但多数情况下胶原蛋白在食品中会被用作功能物质或营养成分。

（二）在化妆品方面的应用

胶原蛋白具有保湿作用、修复皮肤、美白和润泽头发等作用，使胶原蛋白的这些美容作用，已经广泛应用于化妆品中。

（三）在生物医学领域中的应用

低免疫抗原性、生物相容性、止血作用和可生物降解性是胶原蛋白作为生物医学材料的优势所在。近年来，英美等国采用注射性胶原来整复面部软组织的各种损伤。我国研制的胶原注射剂已广泛应用于美容界，在延缓皮肤衰老、重建受损肌肤等方面取得了良好的效果，是一种理想的医用材料。

（四）在造纸工业中的应用

作为原料的应用:胶原纤维分子中含有大量的羧基、氨基、羟基，而纤维素中也含有大量羟基和少量羧基，正是由于这两种天然高分子中含有许多的活性基团和活性部位，可通过化学或物理的方法制成复合材料，用于制造书面革、膜塑包装材料、壁纸、生活用纸、遮光纸、农副产品包装材料、生物胶原包装纸、复合生物降解材料等。

油体作为乳化剂。在生产食品、饲料、药物、个人护理产品和工业产品等中得到广泛的应用。与来自矿物的乳化剂相比，更加环保和可再生。油体蛋白是油体中主要的膜蛋白。油体蛋白存在2-4个亚型。它们在种子发育过程中可呈现出不同的表型，并且伴随着种子的萌发而发生变化。油体蛋白是碱性的疏水蛋白，三个部分组成油体蛋白：亲脂的C端和N端 ，和中间疏水区域，它是通过磷脂膜进入到油体内部。N端和C端则镶嵌在油体表面，暴露在细胞质中。油体蛋白的结构以及它的特异性，使油体在生物技术中得到广泛的应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种拟南芥油体蛋白与重组胶原蛋白肽的融合基因及其表达的蛋白。

一种融合蛋白基因，它是由拟南芥油体蛋白与重组胶原蛋白基因融合而成，其碱基序列如序列表SEQ ID NO.5所示；

一种融合蛋白，它是由上述基因表达的蛋白；

一种表达载体pOBTcol，它是由下述方法制备的：

1）以p1301为基本骨架，利用kpnI和SpeI酶切位点,将35S-Bar基因， T-DNA区NOS基因前，获得p1301-35S-Bar-NOS基本质粒，简称：pO；