[发明专利]一种烷基吡喃酮类化合物及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种烷基吡喃酮类化合物及其制备方法和用途。

背景技术

烷基吡喃酮类化合物(Alkyl pyrones)是吡喃酮类化合物的一类衍生物，结构特征是含有六元环不饱和内酯，常被报道具有广泛的生物活性，如细胞毒性作用、神经毒性作用和植物毒性作用等。本发明人研究得知，棘孢木霉(Trichoderma asperellum) IBPT-2 (2012年10月30日保藏在武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号是：CCTCC NO：M 2012438)菌丝体内代谢产物的粗提物有较好的癌细胞增殖抑制活性，遂对其活性成分进行研究。研究发现所示烷基吡喃酮类化合物具有抗肿瘤活性，目前尚未见该化合物的化学结构及癌细胞增殖抑制活性的报道，因此市场上也尚未见有与此相关的药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种烷基吡喃酮类化合物及其制备方法和用途，该化合物具有抑制癌细胞增殖活性。其结构式为：

。

其结构特征是：含有一个α-吡喃酮结构。

本发明还提供了所述化合物的制备方法：发酵培养棘孢木霉(Trichoderma asperellum)，获取菌丝体，进行破碎萃取处理后，得到菌丝体内代谢产物粗提物，然后从粗提物中分离纯化出该化合物。 

所述棘孢木霉(Trichoderma asperellum)为棘孢木霉(Trichoderma asperellum) IBPT-2，已于2012年10月30日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址：中国 武汉 武汉大学，保藏编号是：CCTCC NO：M 2012438。

本发明还保护了所述的化合物在制备癌细胞增殖抑制剂中的用途。所述癌细胞优选为人淋巴癌细胞RAJI。及该化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。

    本发明的显著优点：研究所示烷基吡喃酮类化合物属于活性吡喃酮类化合物，并且含有一个α-吡喃酮结构。所述烷基吡喃酮类化合物具有抗肿瘤活性，目前尚未见该化合物的化学结构及癌细胞增殖抑制活性的报道，因此市场上也尚未见有与此相关的药物。

具体实施方式

在如下的实施例中所指的化合物的化学结构：

    

实施例1该化合物的发酵生产及分离精制

1发酵生产

生产菌的发酵培养：按培养微生物的常规方法，取棘孢木霉(Trichoderma asperellum) (2012年10月30日保藏在武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号是：CCTCC NO：M 2012438)适量，接种到PDA固体斜面培养基上在28℃培养箱中培养4天。

取斜面培养4天的菌株适量，接种到装有400mL培养液[培养基组成(克/升)：甘露醇20.0，酵母膏3.0，麦芽糖20.0，味精10.0，葡萄糖10.0，KH₂PO₄ 0.5，MgSO₄ 0.3]的1000 mL锥形瓶中，28℃静止培养30天后，获得菌丝体和发酵液。

2 浸膏的获得

 发酵完成后，用纱布将菌丝体和发酵液分离。用含丙酮与水4:1的溶液浸泡溶解菌丝体细胞壁，超声辅助破碎，用多层纱布过滤得到菌丝体的丙酮粗提物。菌丝体破碎后得到的丙酮粗提物旋转蒸发除去丙酮，直至剩下粗提物的水溶液。按体积比为1:2加入乙酸乙酯，连续萃取两遍，合并后减压浓缩至干，得到菌丝体内代谢产物的乙酸乙酯浸膏。

3 化合物的分离精制 

该浸膏通过100-200目硅胶拌样后固体上样，以石油醚：二氯甲烷：甲醇为洗脱液用减压硅胶色谱柱梯度洗脱。洗脱液经过活性跟踪（对人黑色素瘤细胞株A375抑制），得到活性组分D (二氯甲烷-甲醇v/v 30:1洗脱物)，然后以石油醚：二氯甲烷：甲醇梯度组分为洗脱液，进一步通过加压硅胶柱层析梯度洗脱，得到的活性亚组分D2(二氯甲烷-甲醇为20:1的洗脱物)通过氯仿-甲醇(v/v 2:1)为溶剂进行Sephadex LH-20凝胶柱层析，再经过RP-18反相硅胶柱层析以甲醇-水(v/v 3:2)为溶剂洗脱，最后通过半制备液相色谱(1010型ODS-A，10×250 mm，5μm)：分离流速为5 mL.min^-1，流动相为60%乙腈，得到所示化合物(21.3 mg，t_R 17.63min)。