[发明专利]一种绵羊山羊甾体激素抗原双胎苗生产工艺

权利要求书

1.一种绵羊山羊甾体激素抗原双胎苗生产工艺，其特征在于，包括以下步骤：

(1)盐酸羧甲基羟胺的合成

11)A液的配制：将122.4g溴乙酸与200g碎冰混合，再加入40％氢氧化钠100ml：

12)B液的配制：将58.4g丙酮肟置于冰水浴中，加入40％氢氧化钠100ml；

13)待氢氧化钠完全溶解后，将AB液混合，混合液明显呈碱性，让混合液逐滴通过用蒸汽加热的直型冷凝管，收集与放在冰水浴的三角瓶中，直型冷凝管内管长度70cm，放置倾角20度，液滴通过时间2～3秒；

14)步骤13)所得溶液用乙醚洗三次，每次100ml，水相放冰水浴中加浓盐酸100ml，然后用氯化钠饱和，立即用乙醚提取6次，每次200ml，蒸发提取液中的乙醚，保留剩余物；

15)将步骤14)的剩余物加200ml水、微量对苯二酚和200ml浓盐酸，减压浓缩至无液体流出时取出，加30ml的异丙醇，放4℃冰箱过夜，析出晶体用布氏漏斗过滤，并用冷的异丙醇洗涤，收集产物，自然干燥，过滤后的母液减压浓缩后，再加异丙醇，还可得到3-4g产物，得到的产物为带有光泽的白色针状晶体，将产物溶解于二倍体积的50℃热水中，再加二倍体的异丙醇进行重结晶；

(2)睾酮抗原的合成

21)睾酮-3-羧甲基肟的合成：

将2.68g睾酮和2g盐酸羧甲基羟胺溶解与400ml无水乙醇，加5％氢氧化钠40ml，加热回流1.5小时，减压浓缩至30ml左右，用50ml蒸馏水稀释，用乙醚洗涤两次，每次100ml，水相用浓盐酸调PH到1，再用乙醚提取5次，每次100ml，提取液用蒸馏水洗3次，加3-5ml无水硫酸钠脱水过夜，蒸去乙醚，冷却后的白色结晶，烘干后得产品2.96g，产率87％，

22)睾酮-3-羧甲基肟·BSA的制备：

秤5.3g睾酮-3-羧甲基肟加140ml二氧六环，溶解后加3.5ml三正丁胺，冷却到10℃，加2ml氯甲酸异丁脂，4℃反应30分钟，秤20g牛血清白蛋白溶于500ml水-二氧六环(1∶1V/V)和1N氢氧化钠20ml，将睾酮-3-羧甲基肟溶液加入牛血清白蛋白溶液中，4℃搅拌反应4小时，反应时应随时测PH，并随时滴加1N氢氧化钠，使PH维持在8.5～9.0，将反应液透析24小时，透析液用1N盐酸调制PH至4.5，调节时有沉淀产生，放置4℃冰箱，四天后离心收集沉淀，沉淀物用5％碳酸氢钠溶解，完全溶解后进行冷冻干燥，冻干后的产品20.2g，产率达99％以上，

(3)加入佐剂

采用进口的206佐剂。

2.根据权利要求1所述的绵羊山羊甾体激素抗原双胎苗生产工艺，其特征在于，步骤12)中加入氢氧化钠时的温度≤20℃。

3.根据权利要求1所述的绵羊山羊甾体激素抗原双胎苗生产工艺，其特征在于，步骤14)中加浓盐酸时的温度≤15℃。