[发明专利]酶法合成氨基酸神经肽的前体二肽

说明书

一、技术领域

本发明涉及生物化学领域，具体涉及酶促合成氨基酸神经肽的前体二肽。

二、背景技术

神经系统疾病是人类重要疾病之一。在现代社会里，由于生活节奏的加快，工作的压力以及来自家庭、社会各个方面的不利因素的影响，使一些人患上神经系统疾病。轻者精神不能集中，夜里失眠，脾气暴躁或精神忧郁等；重者达到精神分裂的程度。由众多医院神经科提供的信息表明，目前神经系统疾病的患者有增加的趋势，但缺少有效的治疗药物，特别是缺少对神经系统有调节作用的药物。生物活性肽是生命活动中起调节作用的一类重要物质，有一些小肽对神经系统具有调节作用。本研究在非水介质中酶法合成了氨基酸神经肽Phe-Arg-Trp-Gly(FRWG)的前体二肽，FRWG是促肾上腺皮质激素(ACTH)的活性中心，是其发挥作用的关键部位，而大脑中的ACTH可能参与意识行为的调控，因此合成此肽具有较高的研究价值和应用价值。

三、发明内容

在非水介质中酶法合成了氨基酸神经四肽Phe-Arg-Trp-Gly(FRWG)的前体二肽BOC-Phe-Arg-OMe，胰凝乳蛋白酶(ChyT)作为催化剂在水-有机溶剂体系中催化合成；分离纯化；鉴定目标二肽。

四、具体实施方式

1、BOC-Phe-Arg-OMe的酶促合成

BOC-Phe加入质量为0.53g(2mmol)，Arg-OMe加入质量为1.04g(4mmol)；有机溶剂和一定量的Tris-HCl缓冲液20ml；三乙胺，1ml；加入酶，2g；40℃水浴振荡8h，加入10ml三氯乙酸(TCA)终止反应，用质谱检测产物的生成和HPLC分析。

2、肽产物分离纯化

产物二肽BOC-Phe-Arg-OMe的分离纯化采用Sephadex G-10分子筛凝胶柱层析。取100gSephadex G-10干柱料，加500ml蒸馏水浸泡过夜，减压除气泡后装柱。洗脱液平衡过夜。待分离液体0.5ml上样层析。检测波长：220nm，流速：1.0ml/min，收集产品峰，冻干得产物。

3、肽产物的鉴定

产物的鉴定主要使用质谱确定分子量的方法。酶促肽合成因其条件温和，催化专一性强，故基本没有氨基酸内部共价键的断裂，而且由于使用N端保护氨基酸为底物，基本避免了与目标产物氨基酸顺序相反的副产物的产生，因此通过确定分子量的方法就可以鉴定产物。质谱(MS)条件如下：离子化模式：API-ES；极性：阳性；电压：4000V；喷雾器压力：35psig；烘干气流：10L/min；温度：350℃；扫描范围：100-600a.m.u.(atomic mass units)。