[发明专利]一种卡那霉素A酶联适配体检测方法及应用

权利要求书

1.一种卡那霉素A酶联适配体检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.用碳酸盐缓冲液稀释链霉亲和素得1~64 μg/mL的包被缓冲液，将包被缓冲液加入微孔板中，每孔100~200 μL，包被过夜，洗涤微孔板后，加入封闭缓冲液封闭，最后烘干；

    S2.用PBS缓冲液稀释5’端修饰有生物素的卡那霉素A的ssDNA 适配体得浓度为0.5~8 nmol/L的适配体溶液，将适配体溶液加入步骤S1的微孔板中，每孔100~200 μL，孵育，洗板后拍干；得固相适配体；

S3.用辣根过氧化物酶标记卡那霉素A 分子形成标记竞争物KaA-HRP；

S4.将待测样品和KaA-HRP同时加入步骤S2制备得到的固相适配体中，即可实现卡那霉素A的酶联适配体检测；

所述卡那霉素A的ssDNA 适配体的序列如SEQ ID NO：1所示。

2.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.用碳酸盐缓冲液稀释链霉亲和素得1~64 μg/mL的包被缓冲液，将包被缓冲液加入微孔板中，每孔100~200 μL，包被过夜，用磷酸盐缓冲液洗涤微孔板后，再加入0.1~0.3%酪蛋白封闭，最后烘干；

    S2.用PBS缓冲液稀释5’端修饰有生物素的卡那霉素A的ssDNA 适配体得浓度为0.5~8 nmol/L的适配体溶液，将适配体溶液加入步骤S1的微孔板中，每孔加入100~200 μL，孵育，洗板后拍干；得到固相适配体；

S3.用辣根过氧化物酶标记卡那霉素A 分子形成标记竞争物KaA-HRP；

S4.将待测样品和标记竞争物KaA-HRP同时加入步骤S2制备得到的固相适配体中，即可实现卡那霉素A的酶联适配体检测；

所述卡那霉素A的ssDNA 适配体的序列如SEQ ID NO：1所示。

3.根据权利要求1或2所述检测方法，其特征在于，步骤S1所述包被缓冲液中链霉亲和素的浓度为1~32 μg/mL；步骤S2所述适配体溶液中适配体的浓度为0.5~4 nmol/L。

4.根据权利要求3所述检测方法，其特征在于，步骤S1所述包被缓冲液中链霉亲和素的浓度为7~9 μg/mL；步骤S2所述适配体溶液中适配体的浓度为0.5~1 nmol/L。

5.根据权利要求1或2所述检测方法，其特征在于，步骤S1所述碳酸盐缓冲液为pH 9.6，0.01~0.5 mol/L的碳酸盐缓冲液。

6.根据权利要求1或2所述检测方法，其特征在于，步骤S2所述PBS缓冲液为含有4~6 mM MgCl₂的0.01 mol/L pH 7.4的PBS缓冲液。

7.根据权利要求1或2所述检测方法，其特征在于，步骤S3中所述标记的方法为：将卡那霉素A和辣根过氧化物酶按照1:250~300的摩尔比混合后溶于1~2 mL PBS溶液中，加入20~40 mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺，室温反应1~2 h，透析2~4天，即可完成标记。

8.根据权利要求7所述检测方法，其特征在于，所述PBS溶液为0.01 mol/L，pH 7.2的PBS溶液。

9.权利要求1至8任一项所述卡那霉素A酶联适配体检测方法在检测食品中卡那霉素A中的应用。

10.根据权利要求9所述应用，其特征在于，所述食品为牛奶、猪肉、鸡肉、猪肝或蜂蜜。