[发明专利]东北红豆杉开放式简化培养基

说明书

技术领域

本发明属于植物组织培养工厂化育苗培养基技术领域，涉及一种东北红豆杉开放式简化植物组织培养基。

背景技术

目前，虽然已经有上千种植物的组织培养取得了成功，但能真正用于商品化生产的植物种类不多。常规的封闭式组培有许多局限，如：配制培养基所用化学药品种类繁多，用量多，要求精细，价格昂贵，组织培养过程中对设备要求严格，并且要求严格的灭菌条件，导致耗电量较大，生根方法烦琐，且有的组培苗生根很难，移栽适应能力差，成活率低等问题使组培成本大大提高，甚至导致试管苗比普通苗价格高几倍甚至几十倍的成本，广大种植者无力购买，试管苗销售量下降，严重限制了该技术的扩大和推广，致使许多品种没有得到开发利用。针对以上问题，我们开展了开放式植物简化组织培养技术研究，具有重要的现实意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种成本低、初培芽诱导及萌动效果好，继代苗增殖率高，芽的平均伸长量大的东北红豆杉开放式简化培养基。

为了解决上述技术问题，本发明的东北红豆杉开放式简化培养基包括初代培养基和继代培养基；

所述初代培养基通过在优化的B₅基础母液中加入卡拉胶、白砂糖、吲哚丁酸IBA、活性炭AC和农用链霉素混合制成；混合液中卡拉胶浓度为6～10g/L，白砂糖浓度为20～30g/L，吲哚丁酸IBA浓度为2.5～5.0mg/L，活性炭AC浓度为0.5～2.5g/L，农用链霉素浓度为0.10～0.50g/L；

所述优化的B₅基础母液中，无机盐组成如下：

KNO3：1500-3000mg/L；MgSO4·7H2O：250-500mg/L；CaCl2·2H2O：100-150mg/L；(NH4)2SO4：70-134mg/L；NaH2PO4·H2O：75-150mg/L；其余成分及使用浓度与标准B₅培养基相同；

所述继代培养基通过在优化的MS基础母液中加入卡拉胶、白砂糖、吲哚丁酸IBA、6-卞氨基腺嘌呤BA、活性炭AC和农用链霉素混合制成；混合液中卡拉胶浓度为8～10g/L，白砂糖浓度为20～30g/L，吲哚丁酸IBA浓度为1.0～3.0mg/L，6-卞氨基腺嘌呤BA浓度为0.03～1.00mg/L，活性炭AC浓度为0.5～2.5g/L，农用链霉素浓度为0.10～0.50g/L；

所述优化的MS基础母液中，无机盐组成如下：

硝酸钾KNO3：950-1900mg/L；硝酸铵NH4NO3：825-1650mg/L；磷酸二氢钾KH2PO4：85-170mg/L；硫酸镁MgSO4·7H2O：185-370mg/L；氯化钙CaCl2·2H2O：220-440mg/L，其余成分及使用浓度与标准MS培养基相同。

所述优化的B₅基础母液中，无机盐组成优选如下：

KNO3：1500-1550mg/L；MgSO4·7H2O：250-270mg/L；CaCl2·2H2O：100-110mg/L；(NH4)2SO4：70-80mg/L；NaH2PO4·H2O：75-85mg/L；其余成分及使用浓度与标准B₅培养基相同。

所述优化的MS基础母液中，无机盐组成优选如下：

硝酸钾KNO3：950-1000mg/L；硝酸铵NH4NO3：825-850mg/L；磷酸二氢钾KH2PO4：85-90mg/L；硫酸镁MgSO4·7H2O：185-190mg/L；氯化钙CaCl2·2H2O：220-230mg/L，其余成分及使用浓度与标准MS培养基相同。

本发明的东北红豆杉组织培养方法包括下述步骤：

初代培养：取当年生半木质化2-6cm的茎尖作为外植体，接种于塑料杯的初代培养基中，用透气膜封口；接种后，将接种杯置于人工气候箱中，温度25±1℃、湿度80～85%、光照强度1700—2000lux，光暗交替12h/12h，培养15天后获得初培苗；

继代培养：取初培苗接种于塑料杯的继代培养基中，用透气膜封口；接种后，将接种杯置于人工气候箱中，温度25±1℃、湿度80～85%、光照强度1700—2000lux，光暗交替12h/12h，培养35-40天。

有益效果：

初代培养基中添加0.1%活性炭可以使初代培养芽的萌动时间从13d降为6d，大大降低了初代培养的时间，抑制了褐化现象，可以使初代培养周期缩短一周，提高了成活率，降低了生产成本。