[发明专利]白血病融合基因的检测方法及其引物、探针和基因芯片

权利要求书

1.用于非诊断目的的多重RT-PCR联合基因芯片检测多种融合基因的方法，其特征在于，步骤为：

1)抽提样本细胞总RNA；

2)将步骤1)得到的RNA特异性逆转录为cDNA，RNA逆转录为cDNA的引物组合为如SEQ IDNo：1～16所示的序列或其完全互补链；

3)以cDNA为模板，进行两轮巢式多重RT-PCR扩增反应，PCR引物组合为如SEQ ID No：17～30所示序列或其完全互补链；

4)用含有一条以上检测融合基因的特异性探针的基因芯片检测PCR扩增产物中是否含有相应的融合基因片段，所述特异性探针的序列为如SEQ ID No：31～80所示的序列或其完全互补链，探针5’端修饰有氨基；

所述步骤3)，第一轮PCR体系20μl，包括：1μl cDNA、3pmol各种PCR引物、4pmol SP6、11mM Tris-HCl、55mM KCl、1.5mM MgCl₂、15％DMSO、0.4mM dNTP和1.25U ExTaq HS酶；第二轮PCR体系20μl，包括：1μl第一轮PCR产物、10mM Tris-HCl、50mM KCl、1.5mM MgCl₂、0.2mMdNTP、2pmol T7和2pmol标记生物素的SP6和1U ExTaq HS酶；第一轮PCR程序包括25圈循环，第二轮PCR程序包括30圈循环，每圈循环包括：95℃变性30秒，55℃退火40秒，72℃延伸1分钟；循环结束后，均在72℃延伸7分钟。

2.用于权利要求1所述方法的检测融合基因的特异性探针组，其特征在于，探针的序列为SEQ ID NO：31～80所示的序列或其完全互补链，探针5’端修饰有氨基。

3.用于权利要求1所述方法的检测融合基因的基因芯片，其特征在于，含有权利要求2所述的探针组。

4.用于权利要求1所述方法的引物与探针的组合，其特征在于，RNA逆转录为cDNA的引物组合为如SEQ ID No:1～16所示的序列或其完全互补链，多重RT-PCR扩增cDNA的引物组合为如SEQ ID No:17～30所示的序列或其完全互补链，探针的序列为SEQ ID NO：31～80所示的序列或其完全互补链，探针5’端修饰有氨基。