[发明专利]一种连翘叶中连翘酯苷A和连翘苷含量的测定方法

说明书

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及成分的含量测定方法。

背景技术

连翘Forsythia suspensa（Thunb.）Vahl是木犀科植物连翘属落叶灌木。其果实为常用中药材，具有清热解毒，消肿散结，疏散风热的功效，具有显著地解热，抗菌，抗病毒的作用。连翘苷和连翘酯苷A作为其中的主要有效成分列入了2010年版《中国药典》含量测定的指标成分。有文献报道，连翘叶中的某些有效成分含量高于连翘果实，具有明显的抗氧化、抗衰老等作用，部分地区常用连翘嫩叶制成连翘叶茶饮用，具有较好的保健价值。

目前也有测定连翘叶中活性成分的含量方法，但是重复性差，效果不好。

发明内容

本发明的目的是提供一种重复性好、结果准确的测定连翘叶中连翘苷和连翘酯苷A含量的测定方法。

本发明所采用的技术方案是：

一种连翘叶中连翘酯苷A和连翘苷含量的测定方法，该方法由以下步骤构成：

A、供试样品溶液的制备：精密称取连翘叶粉碎样品0.1-0.5g，加入50-70%甲醇50ml，然后称重，超声提取10-30min，放冷后称重，甲醇补足减失重量，摇匀过滤，即得供试样品溶液；

B、对照品溶液的制备：精密称取连翘酯苷A、连翘苷对照品，分别用50-70%甲醇配制成不同浓度的连翘酯苷A、连翘苷对照品溶液；

C、HPLC色谱条件：色谱柱C₁₈柱，流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液，流速为1.0mL/min，检测波长为215-280nm，柱温为30℃；

D、标准曲线的制定及计算结果：将不同浓度的连翘酯苷A、连翘苷对照品溶液6-10μl在步骤C色谱条件下分析，以峰面积积分值为纵坐标，进样量为横坐标，绘制连翘酯苷A、连翘苷的标准曲线，将供试样品溶液在步骤C色谱条件下分析，将连翘酯苷A、连翘苷的峰面积积分值代入标准曲线，分别得到连翘酯苷A、连翘苷的含量。

作为优选，步骤A中用0.22μm滤膜滤过。

作为优选，步骤C中色谱柱规格为5μm，4.6×150mm。

作为优选，步骤C中甲醇-0.1%磷酸溶液的比例为27-37:73-63。

以下是本发明方法的精确度、精密度的检测结果。

仪器与试药

Waters高效液相色谱仪，包括2695 Separations Module，2998 Photodiode Array Detector，工作站：Empower 2 Software Build 2154；超纯水（Milli-Q Advantage A10超纯水系统）；甲醇（Fisher,色谱纯）；其他试剂为分析纯；连翘酯苷A对照品（批号为111810-201102，供含量测定用，含量以93.2%计）来自中国食品药品检定研究院；连翘苷对照品（批号为110821-200610）来自中国药品生物制品检定所；连翘叶由石家庄以岭药业股份有限公司提供，批号为20120501、20120901、20120902、20121101。

方法学考察

专属性试验：在上述色谱条件下，分别吸取连翘酯苷A对照品溶液、连翘苷对照品溶液、供试品溶液和空白对照溶液进行检测。结果阴性无干扰，连翘酯苷A峰、连翘苷峰与其他峰分离良好。

线性关系考察：分别精密吸取浓度为29.3170μg/ml、58.6340μg/ml、73.2925μg/ml、146.5850μg/ml、219.8774μg/ml、366.4624μg/ml的连翘酯苷A对照品溶液各10μl，和浓度为33.3760μg/ml、66.7520μg/ml、83.4400μg/ml、166.8800μg/ml、250.3200μg/ml、417.2000μg/ml的连翘苷对照品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，连翘酯苷A和连翘苷的进样量（ng）为横坐标，绘制标准曲线：计算得回归方程：Y_{连翘酯苷A}= 1281.3706X +4256.8182  r=0.999980， Y_连翘苷= 2034.5969X -10608.2670  r=0.999991，结果表明连翘酯苷A在293.170～3664.624ng范围内；连翘苷进样量在333.760～4172.000ng范围内，具良好的线性关系。