[发明专利]一株辛酰溴苯腈降解假单胞菌MXB-03及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物高技术领域，是利用微生物的方法降解化学农药，适用于现代农业生产中绿色无公害农产品的生产与加工，具体涉及一株辛酰溴苯腈降解假单胞菌MXB-03及其应用。

背景技术

随着人们生活水平的提高和环境保护意识的增强，全社会对农药残留带来的直接危害和潜在影响亦愈来愈关注，人们迫切需要无农药残留污染的清洁的绿色农产品。但从目前我国的农业生产形式和人口状况来看，以停止农药使用降低农业产量为代价的无公害生产模式是行不通的，农药作为控制病虫害的有效手段还将继续在农业生产中发挥巨大的作用。如何能解决农业生产中的这个两难问题就成为各个学科的研究热点。实验室和实际应用研究都表明利用微生物来降解消除土壤中的农药残留“库”容量，从而降低粮食、蔬菜、茶叶等农产品中的农药残留，提高农产品的品质和经济价值是可行的。

辛酰溴苯腈是法国罗纳普朗克公司首先开发的触杀型旱田除草剂，30%辛酰溴苯腈乳油在我国已获临时登记。辛酰溴苯腈已经在我国广泛应用于小麦和玉米田中防除杂草，可有效防除小麦、大麦、玉米、高粱、甘蔗、荠菜等阔叶杂草和水稻田里的疣草等，在欧州和澳大利亚已成为大吨位使用的除草剂。目前国内有关辛酰溴苯腈的合成方法是先制备溴苯腈，再以辛酰氯酯化或辛酸酯化得到辛酰溴苯腈，其中，溴苯腈的制备是辛酰溴苯腈产品的合成关键。辛酰溴苯腈为选择性苗后茎叶处理触杀型除草剂，主要由叶片吸收，在植物体内进行极有限的传导，通过抑制光合作用的各个过程，使植物组织迅速坏死，从而达到杀草目的，气温较高时加速叶片枯死，在杀死杂草的同时，也对作物造成很大的伤害。辛酰溴苯腈能导致啮齿类动物的生殖障碍，一旦进入水体，会产生很强的毒性，对鱼类的生存构成威胁

目前，国内外有关辛酰溴苯腈在环境中降解动态方面的研究不多，而生物修复技术因微生物本身能对各类不同的有机污染物进行降解和转化而具有巨大的潜力。因此，从自然环境中筛选得到能够去除辛酰溴苯腈的有效菌种具有重大的意义。

发明内容

本发明的目的在于针对生产实践中的实际问题和需求，开发研制出一种新型的农药残留降解菌剂，使用本菌剂可以使辛酰溴苯腈的残留量降低90％以上。具有较广的降解谱，生产和使用成本较低。使用该降解菌剂可以在农作物的正常生长过程中正常使用化学农药进行病虫害防治而保证农产品中农药残留含量符合绿色食品要求。

本发明提供一种消除辛酰溴苯腈残留的降解菌，其菌株MXB-03是一株革兰氏染色反应阴性菌，于2013年4月9日保藏于中国微生物菌种保存管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101），保藏编号CGMCC NO.7436，经鉴定是假单胞菌属(Pseudomonas sp.)。主要生物学特性为G^-，在LB固体培养基上菌落呈圆形，直径2mm左右，浅黄色，表面突起，光滑，边缘，经结晶紫染色后在显微镜下菌为短杆状，无芽孢，极生鞭毛；接触酶阳性；氧化酶阴性；不能水解淀粉，不能液化明胶，该菌还能以辛酰溴苯腈为唯一碳源进行生长。

本发明提供了假单胞菌MXB-03在辛酰溴苯腈讲解中的应用。在实验室摇瓶培养条件下辛酰溴苯腈的降解率达90％以上。该菌可以用发酵工业通用发酵设备进行生产。

本发明还提供了含有所述假单胞菌MXB-03的菌剂。

本发明还提供了所述假单胞菌MXB-03生产菌剂的方法。

 所述假单胞菌XB3生产菌剂的方法，具体为：

1） 将辛酰溴苯腈残留的假单胞菌MXB-03的试管种接种于LB培养基中，振荡培养至对数期；

2） 将步骤1）培养好的菌种按10％的接种量接种入500升种子罐，培养至对数生长期，即种子液。

3） 将步骤2）所述种子液按10％的接种量接入生产罐进行发酵培养，生产罐所用培养基与种子罐培养基相同，发酵完成后的培养液即为菌剂。

步骤1）中所述的LB培养基配方为：NaCl 10.00g/L,蛋白胨10.00g/L,酵母粉5.00g/L,pH7.0。