[发明专利]一种枯草芽孢杆菌菌株及其应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物筛选、应用技术领域，具体涉及一种枯草芽孢杆菌菌株及其应用。

背景技术

在畜禽类养殖中，抗生素因能有效的减少畜禽的发病率，提高畜禽生长效率而被广泛应用于畜禽饲料中。但抗生素滥用引起的问题日益受到关注，例如耐药性病原菌增加，畜禽产品药残超标、影响畜禽肠道内微生态平衡和畜禽食品安全性等。对此欧盟已全面禁止饲料中使用抗生素促生长饲料添加剂。为了应对这些问题，采用益生菌微生态制剂来替代抗生素成为当前畜禽养殖的热点。

益生菌在其生长代谢过程中，会分泌产生多种酶类，如淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶等，这些酶的产生可提高饲料利用率，提高动物生长性能。其次益生菌其自身作为一种单细胞蛋白，也可作为动物营养的一部分，促进动物生长。因此，微生态制剂作为一种新型的无毒副作用、无耐药性、无残留的抗生素替代品具有广阔的研究和开发前景。但制备微生物制剂首先需要筛选出具有良好效果的益生菌。

发明内容

本发明的目的是提供一株枯草芽孢杆菌及其在畜禽养殖中的应用，所述枯草芽孢杆菌筛选自健康仔猪的新鲜粪样，具有很强的产淀粉酶、蛋白酶和纤维素酶的能力，可作为饲料添加剂应用于畜禽饲料中，以弥补现有技术的不足。

本发明一方面提供了一株枯草芽孢杆菌，该菌株命名为枯草芽孢杆菌BW2（Bacillus subtilis BW2），已于2013年5月20日保藏于中国武汉 武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO: M 2013222。

本发明的枯草芽孢杆菌BW2应用于饲料添加剂领域。

本发明的另一个方面提供一种包含上述枯草芽孢杆菌BW2的微生物制剂。

上述的微生物制剂为枯草芽孢杆菌BW2的菌粉，按质量百分比为0.2%-0.8%的比例添加至畜禽饲料中。

本发明的枯草芽孢杆菌BW2具有很高的产酶能力，可作为饲料添加剂应用于畜禽饲料中，能有效提高养殖动物的生产性能，应用前景广阔。

具体实施方式

实施例1 枯草芽孢杆菌BW2分离筛选及鉴定：

1、菌株初筛

采集健康仔猪新鲜粪样6份，分别称取5g样品，加入45mL无菌水，制备成悬液，经80℃水浴处理杀死非芽孢营养体后，涂布于LB平板上，37℃培养48小时，获得48株芽孢杆菌。

2、产酶芽孢杆菌筛选

1）α-淀粉酶检测：

淀粉培养基：蛋白胨10g、牛肉膏5g、NaCl 5g、可溶性淀粉2g、蒸馏水1000ml、琼脂粉20g。

将分离到的菌株点种到培养基上，37℃培养24-48小时，在培养基表面滴加适量碘液使均匀布满整个平板，如果菌落周围出现无色透明圈，说明淀粉已被水解。

2）蛋白酶检测：

牛奶培养基：脱脂牛奶50ml、蒸馏水50ml、琼脂粉1.5g。

将分离到的菌株点种到牛奶培养基，37℃培养24-48小时，如果菌落周围有透明圈产生说明酪蛋白已经被水解。

3）纤维素培养基：营养琼脂+0.5%CMC。

将分离到的菌株点种到纤维素培养基，37℃培养24-48小时，用0.1%刚果红溶液染色30分钟，再用1moL/L氯化钠脱色20分钟左右，如果菌落周围出现透明水解圈，说明CMC已经被水解。

4）经过产酶实验，筛选得到一株淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶产量均较高的菌株，对此菌株进一步鉴定分析。

3、芽孢杆菌分类学鉴定

采用分子生物学的方法对筛选得到的高产酶菌株进行鉴定，测得其16s rDNA序列，在GenBank核酸数据库中进行blast比对，通过序列比对确认为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），命名为枯草芽孢杆菌BW2（Bacillus subtilis BW2），并于2013年5月20日保藏于中国武汉 武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO: M2013222。.

实施例2：枯草芽孢杆菌BW2产酶实验

1、α-淀粉酶检测：

淀粉培养基：蛋白胨10g、牛肉膏5g、NaCl 5g、可溶性淀粉2g、蒸馏水1000ml、琼脂粉20g。

将分离到的菌株点种到培养基上，37℃培养24-48小时，在培养基表面滴加适量碘液使均匀布满整个平板，如果菌落周围出现无色透明圈，说明淀粉已被水解。测量透明圈直径与菌落直径的比值。

2、蛋白酶检测：

牛奶培养基：脱脂牛奶50ml、蒸馏水50ml、琼脂粉1.5g。