[发明专利]猪圆环病毒2型、猪支原体肺炎二联灭活疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了一种猪圆环病毒2型、猪支原体肺炎二联灭活疫苗，其含有灭活的猪圆环病毒2型抗原和灭活的猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae）以及油佐剂，其中，所述的猪肺炎支原体为DJ‑166株，保藏号为CGMCC No.4545。本发明提供的猪用二联灭活疫苗在预防猪圆环病毒2型和猪支原体肺炎方面表现出显著的技术效果。安全性试验显示，疫苗单剂量、单剂量重复、超剂量接种试验动物后安全，体温、精神状态正常，无任何临床症状；效力试验显示，本发明疫苗对猪圆环病毒2型和猪肺炎支原体的强毒攻击有良好的保护作用，可有效的预防猪圆环病毒2型和猪支原体肺炎。

技术领域

本发明属于兽用生物制品领域，具体涉及猪圆环病毒2型、猪支原体肺炎二联灭活疫苗及其制备方法。

背景技术

猪支原体肺炎（Mycoplasma hyopneumoniae of swine，MPS）又称猪地方流行性肺炎或猪喘气病，由猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae，Mhyo）引起的猪接触性慢性呼吸道疾病，呈全世界广泛流行，是严重危害养猪业健康发展的主要猪病之一。猪支原体肺炎死亡率虽然不高，但由于流行的广泛性、长期性和消耗性，可使饲料转化率降低，并引起猪的多种并发病，是造成养猪业经济损失的最重要的疾病之一。

目前用于猪支原体肺炎免疫的疫苗有两种，即灭活疫苗和弱毒疫苗。国外厂家生产的多为灭活疫苗，以佐剂克服灭活疫苗的不足，因为肌肉接种，使用方便，但是价格昂贵，且免疫效果方面与国内存在差异。国内生产的弱毒疫苗可以产生较强的局部粘膜免疫力和细胞免疫力，免疫期较长，但需要胸腔内注射，使用不方便，有一定的接种副反应，并且要求疫苗免疫后一周内避免使用抗菌素。因此如何获得一种符合国内猪支原体肺炎流行状况且免疫原性好、保护效果好的灭活疫苗是当务之急。

另外，猪支原体肺炎感染后可引起猪体的免疫抑制，导致猪体的免疫功能下降，对猪的巨噬细胞、T细胞和B细胞的功能均有抑制。因此，猪群一旦发生猪支原体肺炎感染，就很容易与其它病毒和细菌发生混合感染，以猪圆环病毒2型（Porcine Circovirus type2，PCV2）最为常见。而现阶段，国内还没有猪圆环病毒2型、猪支原体肺炎的二联灭活疫苗上市，因此一种能防治猪支原体肺炎和猪圆环病毒2型混合感染的疫苗也是必不可少的。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种猪圆环病毒2型、猪支原体肺炎二联灭活疫苗及其制备方法和应用。

首先，本发明提供一种猪圆环病毒2型、猪支原体肺炎二联灭活疫苗，其含有灭活的猪圆环病毒2型抗原和灭活的猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae）抗原以及油佐剂，其中，所述的猪肺炎支原体为DJ-166株，保藏号为CGMCC No.4545。

其中，所述的油佐剂为Montanide ISA50V2佐剂。

其中，所述的灭活的猪肺炎支原体DJ-166株抗原含量不低于10⁹CCU/ml。

其中，所述的灭活的猪圆环病毒2型抗原的含量不低于10^6.5TCID₅₀/ml。

本发明提供的二联灭活疫苗，其含有的两种抗原之间基本上无干扰现象。

“基本上无干扰现象”是指，所述的二联灭活疫苗在免疫猪以后，两种抗原之间不会显著削弱对方的免疫效果。

本发明还提供所述的二联灭活疫苗的制备方法，其包括如下步骤：

1）分别增殖浓缩猪圆环病毒2型毒液和猪肺炎支原体菌液；

2）分别灭活猪圆环病毒2型浓缩毒液和猪肺炎支原体浓缩菌液；

3）制备油相：将Montanide ISA50V2佐剂装入灭菌瓶内，121℃灭菌30分钟；