[发明专利]一种海马多肽酶解液的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及海洋药物开发领域，尤其是涉及一种海马多肽酶解液的制备方法。

背景技术

海马作为中药材使用在我国已具有悠久的历史，梁代陶弘景《本草经集注》中对海马已有记载“其性温味甘，归肝、肾经，具有温肾壮阳，消肿散结、妇人催生等功效，能够医治呼吸系统失调、性功能障碍、失眠、体乏、咽喉肿痛、皮肤病以及难产等疾症”时称“水马”。公元739年陈藏器在《本草拾遗》中首次使用海马之名并沿用至今，《本草纲目》中记载“主难产及血气痛，暖水脏，壮阳道，消瘕块，治疗疮肿痛”。现代《中国药典》每版均收录了海马入药的记载。在欧洲从18世纪开始将海马入药。迄今为止，除了中国大陆、香港、台湾、新加坡和世界各地的华人社会外，韩国和日本也把海马作为医药和保健食品。菲律宾人利用海马医治哮喘和过度活跃症。海马含蛋白质为67.9～73.56%，含17种氨基酸，7种为人体必需氨基酸，含20余种微量元素，其中锰、锌含量相对较高，含较丰富的不饱和脂肪酸；具有壮阳、抗衰老、抗血栓、抗疲劳、抗肿瘤、增强记忆力等药理作用；三斑海马临床应用于阳痿、不育、虚烦不眠、哮喘、腰腿疼、跌打损伤、腹痛、难产、乳腺癌、结肠癌、肝癌、皮肤癌等且具有治疗效果。

目前，我国沿海各地包括一些大中院校和一些企业已开展海马人工养殖开发应用，药用海马包括三斑海马、日本海马、线纹海马、大海马、刺海马等海马属鱼类。但是，现有的海马或海龙加工品往往采用较为传统的方法，将海马泡成药酒或通过干燥处理直接加工成干货。海马或海龙药酒、海马或海龙干货均不能充分利用海马或海龙各部分营养成分，会造成部分资源浪费。目前，国内外还没有公开任何关于海马多肽酶解液的制备方法的相关研究报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种具有蛋白利用率高、酶解程度彻底、有利于人体消化吸收的功海马多肽口服液的制备方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种海马多肽酶解液的制备方法，包括以下步骤：

（1）海马骨粉脱脂：将海马原材料在-40℃下进行冷冻干燥48～60h，采用药物粉碎机粉碎后过60目筛，取滤过物即得到海马骨粉，再采用CO₂超临界萃取技术进行脱脂，得到海马脱脂骨粉；

（2）一次酶解：将海马脱脂骨粉与水按照40～60g/L的比例装入玻璃容器中，将容器置于水浴锅中在40～50℃中保温8～12min，加入海马脱脂骨粉重量2～4%的胰蛋白酶后调解pH至8.5～9，每隔20～30min调节一次pH至8.5～9，酶解4～6h后，将玻璃容器置于沸水浴中灭酶活10min；

（3）二次酶解：将灭酶活后的玻璃容器继续置于水浴锅中在50～60℃中保持一定时间，加入海马脱脂骨粉重量2～4%碱性蛋白酶后调节pH至8.5～9.5，每隔20～30min调节一次pH至8.5～9.5，酶解6～7h后，将玻璃容器置于沸水浴中灭酶活10min，将上述酶解液在5000r/min条件下进行离心20min，取上清液得到海马多肽酶解液。

步骤（1）中所述的CO₂超临界萃取技术进行脱脂的条件为：萃取温度为58℃、萃取压强为35MPa、静态萃取10min后调节CO2流量为15L/h、动态萃取时间为125min的萃取条件下对海马骨粉进行脱脂。

步骤（2）中所述的海马脱脂骨粉与水按照30g/L的比例混匀。

步骤（2）中所述的胰蛋白酶的酶解条件为：温度为45℃、添加量为海马脱脂骨粉重量3%、pH为8.8、时间为4h，间隔25min调节一次pH至8.8。

步骤（3）中所述的碱性蛋白酶酶解条件为：温度为54.7℃、添加量为海马脱脂骨粉重量的3%、pH为9、时间为6h，间隔25min调节一次pH至9。

所述的海马包括三斑海马、刺海马、线纹海马、大海马、日本海马。

与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明一种海马多肽酶解液的制备方法，工艺简单，操作方便，仪器设备要求低，能耗小，避免化学方法制备多肽过程中的残留和污染，且本法制备多肽水解度高，多肽片段分子量较小，对于先胰蛋白酶酶解再进行碱性蛋白酶酶解的不仅水解度高，而且其分子量更多的分布在30kDa以下且较均匀，利于人体消化吸收。酶作为具有高效的催化性，pH、温度对其催化活性均有较大影响，本发明采用的酶解时间、pH、温度为最适酶解条件。

附图说明

图1为酶解时间对胰蛋白酶和碱性蛋白酶两种酶酶解效果的影响；

图2为酶解pH对胰蛋白酶和碱性蛋白酶两种酶酶解效果的影响；