[发明专利]一种金乌贼蛋白抗氧化肽及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明属于工程技术领域，具体涉及功能性食品加工技术或生物制药技术，尤其是一种酶解金乌贼蛋白制备抗氧化肽的方法。

背景技术

人体代谢和食品氧化变质过程中产生的自由基会对细胞和组织造成严重的氧化损伤，从而导致心血管疾病、动脉硬化、癌症和身体衰老等疾病。以丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）和特丁基对苯二酚（TBHQ）为代表的化学合成抗氧化剂由于抗氧化活性好、价格便宜被广泛地应用到食品工业中。但是，化学合成抗氧化剂的毒副作用引起了广泛关注，部分国家已限量或禁止使用。因此，天然抗氧化剂成为开发热点。

蛋白质优良的乳化特性使其能在油水界面发挥介导作用，从而能在生物体内清除过量自由基，抑制膜脂质过氧化。近年来人们发现，介于蛋白质和氨基酸间的肽类由于结构特点，抗氧化活性往往更为显著。玉米抗氧化肽Leu-Asp-Tyr-Gln、Tyr-Ala 和His-Cys-Met-Leu，大豆抗氧化肽Leu-Val-Asn-Pro-His-Asp-His-Gln-His-Gln-Asn、Leu-Leu-Pro-His-His-Ala-Asp-Ala-Asp-Ala-Asp-Tyr、Leu-Leu-Pro-His-His、Val-Asn-Pro-His-Asp-His-Gln-Asn，对虾抗氧化肽Ile-Lys-Lys、Phe-Lys-Lys和Phe-Ile-Lys-Lys，阿拉斯加青鲜鱼抗氧化肽Leu-Pro-His-Ser-Gly-Tyr等均显示了显著的生物活性，具有较大的应用前景。

金乌贼（Sepia esculenta），又名墨鱼、乌鱼，属软体动物门、头足纲、乌贼目、乌贼科，分布在我国沿海，以黄、渤海产量较多。金乌贼肉营养丰富，蛋白质含量高，并富含钙、磷、铁等元素。目前，金乌贼主要鲜用、加工成罐头食品或干制品。但是，申请人发现，以金乌贼蛋白为原料，利用酶解、超滤和色谱等技术制备高活性抗氧化肽及其应用未见报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状提供一种能够抑制脂质过氧化和清除自由基作用的金乌贼蛋白抗氧化肽，其可作为药品、保健食品和食品添加剂。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种金乌贼蛋白抗氧化肽的制备方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：该金乌贼蛋白抗氧化肽，其特征在于该抗氧化肽为十肽化合物，氨基酸序列为AEH-P3：Ala-Pro-Pro-Glu-Asn-Gly-Met-Ala-Gln-Met（APPENGMAQM），分子量为1045.21 Da。

上述金乌贼蛋白抗氧化肽的制备方法，其特征在于包括下述步骤：

1）将洗净、去内壳的金乌贼肉用高速组织捣碎机匀浆，按照料液比1g:3~5mL加入异丙醇，于35~40℃中脱脂18~24 h，然后于4000~5000 rpm离心10~15min除去异丙醇，收集脱脂金乌贼肉固形物；

2）按固液比1g:1~3mL向步骤1）所得脱脂金乌贼肉固形物中加入0.2 mol/L磷酸盐缓冲液，调节pH为6.5~7.5，得到混合液；

3）将上述混合液温度升至50~60℃搅拌预热10~15 min，以脱脂金乌贼肉固形物的质量为基准加入0.8~1.2%的木瓜蛋白酶，在50~60℃酶解4~6h，得到酶解产物；

4）将上述酶解产物升温至90~95℃并恒温保持10~15min后，冷却至室温，然后于4000~5000 rpm离心10~15min，得到酶解液，冻干得酶解物干粉；再将酶解物干粉依次经超滤和层析处理，得到抗氧化肽。

作为改进，所述步骤4）的超滤和层析的具体过程为：

超滤：将酶解物干粉溶于pH 6.5~7.5的磷酸盐缓冲液配成10~15 mg/mL的溶液，于0.1 ~ 0.15 MPa的工作压力和20 ~ 25 ℃的温度下采用3 kDa超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于3 kDa部分，得超滤酶解液，冻干得超滤酶解物干粉；