[发明专利]一种制备高腺苷含量的虫草制剂的方法

权利要求书

1.一种制备高腺苷含量的虫草制剂的方法，包括以下步骤：

1）将分离自虫草子实体的真菌类菌株经固体培养和摇床培养后，得到菌丝体；

2）将步骤1）得到的菌丝体接种到含有木薯蚕蛹水提液的培养液中进行深层发酵，得到深层发酵菌丝体；

3）超高压处理步骤2）得到的深层发酵菌丝体，使菌丝体和微生物瞬间破壁；然后离心发酵液，分离得到菌丝体和菌液；

4）步骤3）得到的菌液精滤后经低温浓缩制成高腺苷含量的虫草口服液，菌丝体经低温干燥后，超微粉碎成高腺苷含量的纳米级虫草微粉。

2.权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1）所述的分离自虫草子实体的真菌类菌株选自中华被毛孢、蝙蝠蛾拟青霉、被包霉属、北虫草菌r3或头孢菌改良菌株A10中的任意一种。

3.权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1）所述的分离自虫草子实体的真菌类菌株为中华被毛孢菌株。

4.权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1）所述的固体培养是在PDA斜面培养基中培养，按重量份计，所述的PDA斜面培养基中含有10-20%的马铃薯、2-3%的葡萄糖、1-3%的琼脂；所述的固体培养条件优选18-25℃，pH值为5-6，培养时间为8-10天；步骤1）所述的摇床培养条件是温度为18-25℃，转速为180-210rpm，时间为2-5天。

5.权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2）所述的深层发酵培养液中，每1000毫升中含有由1-12g干重的木薯蚕蛹粉制得的水提液。

6.权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2）所述的深层发酵培养液每1000毫升中含有葡萄糖60-100克，酵母粉20-80克、蛋白胨水解液30-100毫升（v/v），由1-12克木薯蚕蛹干粉制得的水提液，0.1-1g的MgSO₄·7H₂O，0.1-1g的KH₂PO₄，pH值为5-6。

7.权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2）所述的深层发酵过程，接种量为5-15%v/v，温度18-25℃，压力0.6-0.8Kg/cm²，搅拌速率为100-260rpm，通气量为1:0.5～1:12，发酵时间为3-6天。

8.权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤3）所述的超高压处理是将步骤2）得到的发酵液在低于60℃的常温或较低温度下，用100-400MPa的压力处理5-10分钟。

9.权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤3）所述的离心是采用高速离心机在3000-3500rpm下离心10-15分钟。

10.权利要求1所述的制备高腺苷含量的虫草制剂的方法，包括以下步骤：

1）将中华被毛孢菌株转接于PDA斜面培养基上，进行培养，活化，所用培养基中，按重量百分比计，含有10-20%马铃薯，2-3%葡萄糖，1-3%琼脂；培养条件为18-25℃、pH值5-6，培养8-10天；挑取菌丝体接种于装有液体培养基的摇床中培养，所述的液体培养基每1000毫升中含有葡萄糖60-100克，酵母粉20-80克、蛋白胨水解液30-100毫升，0.1-1g的MgSO₄·7H₂O，0.1-1g的KH₂PO₄，pH值为5-6；摇床培养温度为18-25℃，转速为180-210rpm，培养2-5天；

2）将步骤1）摇床培养得到的菌丝体，接种至装有培养液的发酵罐中，接种量为5-15%（v/v），所述的培养液每1000毫升中含有葡萄糖60-100克，酵母粉20-80克、蛋白胨水解液30-100毫升，由1-12克木薯蚕蛹干粉制得的水提液，0.1-1g的MgSO₄·7H₂O，0.1-1g的KH₂PO₄，pH值为5-6；发酵罐保温18-25℃，罐压0.6-0.8Kg/cm²，搅拌速率为100-260rpm，通气量为1:0.5～1:12，发酵3-6天，得到深层发酵的菌丝体；

3）在低于60℃的温度下，用100-400MPa的超高压方法处理步骤2）得到的深层发酵菌丝体5-10分钟；然后在3000-3500rpm下离心10-15分钟，分离得到菌丝体和菌液；

4）将步骤3）得到的菌液经微滤、超滤和浓缩制成高腺苷含量的虫草口服液；将步骤3）得到的菌丝体50℃干燥后，超微粉碎制成高腺苷含量的纳米级虫草粉。