[发明专利]一种裸地胆草素的提取纯化方法

说明书

技术领域

本发明属于中药制药领域，涉及一种裸地胆草素的提取纯化方法。

背景技术

裸地胆草素（Nudaphantin）分子式为C₂₁H₂₆O₇，分子量为390.43，是从菊科植物裸地胆草Elephantus nudatus Grey全植物中提取分离得到的一种倍半萜内酯类化合物。药理研究表明，裸地胆草素对KB细胞具有细胞毒活性，其ED₅₀为0.31μg/mL。徐峰对裸地胆草分别采用己烷、氯仿和甲醇提取，发现氯仿提取物所得产物为深绿色糖浆，具有极强的细胞毒活性，再经硅胶柱层析和制备TLC分离得到Nudaphantin，并视其为新细胞毒成分。

目前，国内尚未见裸地胆草素的亚临界萃取方法方面的专利报道。

发明内容

本发明旨在克服上述技术缺陷，提供一种分离效果好、收率高、产品纯度好，适合工业化生产的裸地胆草素的提取纯化方法。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种裸地胆草素的提取纯化方法，其特征是：以裸地胆草为原料，采用亚临界流体萃取，控制萃取压力为7-9MPa，萃取温度为42-55℃，通入丙烷，静态萃取22min后动态萃取30-60min，所得萃取物进行高压硅胶柱层析，用石油醚-丙酮梯度洗脱，薄层层析，收集含裸地胆草素的组分，浓缩成浸膏后用甲醇溶解，经制备型液相色谱进行纯化，甲醇水溶液进行洗脱，浓缩相应组分，放置结晶，结晶干燥即得裸地胆草素。

所述丙烷的流量为5-7.5g/min。

所述高压硅胶柱的柱压为2.5-3.1MPa，柱内径为150-250mm，层析柱径高比为1:12-20，硅胶目数为200-300目，石油醚-丙酮体积比为100：9-28。

所述甲醇水溶液的体积百分比浓度为70%。

本发明的有益效果是：

1、本发明方法通过亚临界流体萃取、柱层析及制备型液相色谱分离、结晶等步骤制备裸地胆草素，耗时短，得率高，操作简单，易于工业化生产。

2、使用特制高压柱层析，上样量大，周期短，分离度好，产品纯度高。

3、本发明为裸地胆草素的进一步开发利用提供药理原料、理论和实践支持。

本发明内容通过以下的实施例作进一步的阐述，但并不限制本发明的范围。

具体实施方式：

实施例1：

取干燥裸地胆草粗粉5kg，装入萃取釜中，通入丙烷流体，控制丙烷流量为7.5g/min，萃取压力为8MPa，萃取温度为48℃，静态萃取22min后动态萃取60min，溶于丙烷的裸地胆草素在分离釜中减压析出，所得萃取物用甲醇溶解湿法上样至填料为300目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为2.5MPa，柱内径为150mm，层析柱径高比为1:18，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比100:10、100:15、100:20、100:28洗脱，分段收集各流分，将含裸地胆草素流分合并，减压回收溶剂，加甲醇溶解，注入制备型液相色谱中，以70%的甲醇水溶液为流动相，流速为15ml/min，紫外检测器在线监测，收集高纯度裸地胆草素流分，浓缩，放置结晶，滤出结晶，干燥即得裸地胆草素，HPLC检测，含量为95.7%。

实施例2：

取干燥裸地胆草粗粉5kg，装入萃取釜中，通入丙烷流体，控制丙烷流量为7g/min，萃取压力为7MPa，萃取温度为55℃，静态萃取22min后动态萃取30min，溶于丙烷的裸地胆草素在分离釜中减压析出，所得萃取物用甲醇溶解湿法上样至填料为200目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为3.1MPa，柱内径为200mm，层析柱径高比为1:12，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比100:9、100:15、100:20、100:27洗脱，分段收集各流分，将含裸地胆草素流分合并，减压回收溶剂，加甲醇溶解，注入制备型液相色谱中，以70%的甲醇水溶液为流动相，流速为25ml/min，紫外检测器在线监测，收集高纯度裸地胆草素流分，浓缩，放置结晶，滤出结晶，干燥即得裸地胆草素，HPLC检测，含量为96.4%。

实施例3：