[发明专利]具有吸附重金属离子功能的融合蛋白的构建、表达及其在生物除污中的应用

权利要求书

1.一种包含金属结合多肽和连接肽的十聚体与皮肤细胞黏附三肽的融合蛋白，

其中，金属结合多肽与连接肽连接，位于所述融合蛋白的N端，，共有十次重复，构成所述金属结合多肽和连接肽的十聚体，皮肤细胞黏附三肽位于所述融合蛋白的C端，

其中所述金属结合多肽的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示，所述连接肽的氨基酸序列如SEQ ID No：2所示，皮肤细胞黏附三肽的氨基酸序列如SEQ ID No：3所示，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No：4所示。

2.一种在乳酸菌细胞表面展示表达权利要求1的融合蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：

1)利用细胞表面表达载体构建在细胞表面表达权利要求1所述的融合蛋白的重组表达载体；

2)将步骤1)中构建的重组表达载体转化到乳酸菌细胞中；

3)在适于以表面展示形式表达所述融合蛋白的条件下培养步骤2)中被转化的乳酸菌，由此在所述乳酸菌细胞表面展示表达出权利要求1的融合蛋白。

3.权利要求2所述的方法，其中所述乳酸菌细胞选自干酪乳杆菌(Lactobacillus casei，Orla-Jensen)细胞，粪肠球菌细胞，例如，粪肠球菌OGIX、FA2-2，或植物乳杆菌细胞，优选干酪乳杆菌细胞。

4.权利要求2所述的方法，其中所述适于在乳酸菌表面展示表达所述融合蛋白的条件是指在乳酸菌培养基中，37℃厌氧静置培养24小时，其中所述乳酸菌培养基的成分为：基于培养基总重量，1重量％肉蛋白胨、1重量％牛肉膏、0.5重量％酵母提取物、2重量％葡萄糖、0.5重量％乙酸钠、0.1重量％吐温80、0.2重量％磷酸钾、0.2重量％柠檬酸铵、0.01重量％硫酸镁以及0.0005重量％硫酸锰，pH＝6.5。

5.一种在细胞表面展示表达权利要求1的融合蛋白的乳酸菌细胞。

6.权利要求1所述的融合蛋白或权利要求5所述的乳酸菌细胞在制备用于结合皮肤表面有毒重金属的化妆品或药物中的应用。

7.权利要求6所述的应用，其中所述重金属选自铅、镉、汞或它们的任意组合。

8.权利要求6所述的应用，其中权利要求1所述的融合蛋白或权利要求7所述的乳酸菌细胞以冻干粉针、溶液剂、喷雾剂或凝胶剂的形式存在。

9.一种去除皮肤表面有毒重金属的药物或化妆品，所述药物或化妆品包含有效量的权利要求1所述的融合蛋白或权利要求5所述的乳酸菌细胞。

10.权利要求9所述的药物或化妆品，其中所述重金属选自铅、镉、汞或它们的任意组合；并且所述药物或化妆品以冻干粉针、溶液剂、喷雾剂或凝胶剂的形式存在。