[发明专利]含硒重组人血白蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种含硒重组人血白蛋白的制备方法，包括如下步骤：

构建含重组人血白蛋白基因的毕赤酵母工程菌；

将所述毕赤酵母工程菌进行发酵培养；所述发酵培养过程中向培养基中加入体积分数为0.001%～0.05%的亚硒酸钠；

将发酵培养的产物纯化，得到含硒重组人血白蛋白。

2.如权利要求1所述的含硒重组人血白蛋白的制备方法，其特征在于，所述发酵培养步骤为：

将所述毕赤酵母工程菌在30℃条件下用YPD培养基培养12～18h；

将种子液转移至BMGY培养基中，在温度为28℃，pH值为6的条件下培养，检测菌液OD₆₀₀为0.6时向培养基中加入甲醇溶液；

将温度调整至28℃，PH值调节为5～9发酵培养72～120小时，每隔12小时向培养基中加入甲醇和甘油混合溶液及体积分数为0.001%～0.05%的亚硒酸钠。

3.如权利要求2所述的含硒重组人血白蛋白的制备方法，其特征在于，所述甘油溶液的质量浓度为0.01%～5%，所述甲醇溶液的质量浓度为0.01%～5%。

4.如权利要求1、2或3所述的含硒重组人血白蛋白的制备方法，其特征在于，所述纯化步骤前还包括如下灭活步骤：

将发酵培养后的溶液离心，收集上清液；

将所述上清液在温度为30～80℃条件下热处理1～5小时，离心处理后收集上清液，得到热处理后上清液。

5.如权利要求4所述的含硒重组人血白蛋白的制备方法，其特征在于，所述纯化步骤如下：

将所述热处理后上清液经过（NH₄）₂SO₄沉淀、离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤分离纯化及使用相对分子量为5000～100,000中空纤维超滤膜进行脱盐处理，得到含硒重组人血白蛋白。