[发明专利]一种多负电荷血红蛋白α亚基

权利要求书

1.一种多负电荷血红蛋白α亚基，其特征在于：

所述的多负电荷血红蛋白α亚基是由人血清白蛋白和人血红蛋白α亚基组成的融合蛋白；

所述的融合蛋白是由人血清白蛋白和人血红蛋白之间由连接肽连接而成；

所述的融合蛋白的N-末端由带负电荷的人血清白蛋白结构域和C-末端的人血红蛋白α结构域组成；

所述的融合蛋白多肽链氨基酸序列：

MDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAALGL-连接肽--VLSPADKTNVKAAWGKVGAHAGEYGAEALERMFLSFPTTKTYFPHFDLSHGSAQVKGHGKKVADALTNAVAHVDDMPNALSALSDLHAHKLRVDPVNFKLLSHCLLVTLAAHLPAEFTPAVHASLDKFLASVSTVLTSKYR。

2.一种多负电荷血红蛋白α亚基的制备方法，其特征在于：所述的制备方法步骤如下：

一、通过用血液和肝脏组织中所提取的RNA用RT-PCR扩增的方法获得所述的融合蛋白多肽链氨基酸序列或用化学方法全合成方法合成所述的融合蛋白多肽链氨基酸序列；

二、将步骤一所述的融合蛋白多肽链氨基酸序列克隆至原核表达载体中；

三、将步骤二所述的表达载体转化至表达体系的细胞中；

四、通过IPTG诱导的方法鉴定含有所述的融合蛋白多肽链氨基酸序列的细胞；

五、对步骤四所述的细胞进行分离和纯化。

3.根据权利要求1所述的一种多负电荷血红蛋白α亚基，其特征在于：所述的连接肽的改变相应改变融合蛋白多肽链氨基酸序列和长度，但整个融合蛋白结构和功能不变。

4.根据权利要求2所述的一种多负电荷血红蛋白α亚基的制备方法，其特征在于：所述的原核表达载体为pSumo-Mut。

5.根据权利要求5所述的一种多负电荷血红蛋白α亚基的制备方法，其特征在于：所述的pSumo-Mut含有6xHis-Sumo标签。

6.根据权利要求6所述的一种多负电荷血红蛋白α亚基的制备方法，其特征在于：所述的标签被克隆所用的酶切位点保证正确地加到重组表达的多负电荷血红蛋白α亚基的N末端。

7.根据权利要求1或3所述的一种多负电荷血红蛋白α亚基的制备方法，其特征在于：所述的融合蛋白的结构为折叠后三维结构。