[发明专利]龙眼的检测试剂盒和检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及龙眼的检测试剂盒和检测方法。

背景技术

龙眼(Dimocarpus longan Lour)，俗称“桂圆”，属于无患子科龙眼属,是传统的药食兼用植物，主要分布在热带、南亚热带地区。中国作为龙眼的发源地，已经有近千年的栽培历史，历史上南“桂圆”北“人参”之称。中国是世界上龙眼基因资源最丰富、栽培品种最多的国家。

疯人果又叫龙荔，有毒，其形态特征与龙眼极为近似，容易混淆，导致消费者中毒，存在极大的安全隐患，急需提供一种方法来解决该问题。

发明内容

为了解决龙眼与龙荔易混淆的问题，本发明提供了4种龙眼特异的核苷酸序列及其用途，还提供龙眼的检测试剂盒和检测方法。

本发明4种核苷酸序列如SEQ ID NO.1～4所示。

本发明检测SEQ ID NO.1～4任意一项所示核苷酸序列的试剂在制备龙眼检测试剂中的用途。

所述检测SEQ ID NO.1～4任意一项所述核苷酸序列的试剂包括扩增SEQ ID NO.1～4任意一项所示核苷酸序列的试剂。

所述扩增SEQ ID NO.1～4任意一项所述核苷酸序列的试剂包括SEQ ID NO.5～6、SEQ ID NO.7～8、SEQ ID NO.11～12、SEQ ID NO.13～14、SEQ ID NO.15～16、SEQ ID NO.17～18或SEQ ID NO.19～20所示的核苷酸序列。

本发明检测龙眼的试剂盒，包括任选的用于检测SEQ ID NO.1～4任意一项所述核苷酸序列的试剂。

所述试剂包括扩增SEQ ID NO.1～4任意一项所示核苷酸序列的试剂。

所述扩增试剂包括SEQ ID NO.5～6、SEQ ID NO.7～8、SEQ ID NO.11～12、SEQ ID NO.13～14、SEQ ID NO.15～16、SEQ ID NO.17～18或SEQ ID NO.19～20所示的核苷酸序列。

本发明龙眼的检测方法，包括如下步骤：

a，提取样本DNA：提取待检样本中的DNA；

b，检测：用前述的试剂盒检测待检样本，即可。

本发明SEQ ID NO.1～4所示核苷酸序列为龙眼特异性序列，通过检测这些序列可以有效鉴定待检样本是否为龙眼，准确区别龙眼和龙荔，保证食品安全，操作简便，具有良好的应用前景。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明权利要求书记载的内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1用改良的RAPD技术扩增桂圆的DNA。I4、Q12和Q19分别为不同的RAPD引物，M:为DL2000的DNA分子大小标记，大小为bp，下同；

图2RAPD产物切胶回收纯化后电泳检测，2号：从GY的I4的第4条带来的；4号：从GY的Q19第2、3、4条带来的；5号：从GY的Q12的倒数第2条带；

图3PCR扩增鉴定克隆2-1阳性。设计合成位于载体上序列的T7/SP6引物直接扩增蓝白筛选的白色细菌菌落。克隆2-1,2-2,2-3,2-4,2-6分别是PCR阳性；其中克隆2-1（红色）为强阳性，提取克隆2-1质粒DNA，进行DNA序列分析，获得新的DNA序列（SCAR)；

图4PCR扩增鉴定4-7/4-8阳性克隆。设计合成位于载体上序列的T7/SP6引物直接扩增蓝白筛选的白色细菌菌落。克隆4-1,4-2,4-3,4-7,4-8分别是PCR阳性；其中4-7,4-8（红色），提取质粒DNA，进行DNA序列分析，各获得新的DNA序列（SCAR)；

图5用EcoRI酶切鉴定5号RAPD产物的阳性克隆。克隆5-2和5-2均为阳性克隆，含有一个约500bp的插入片段。取克隆5-2（红色），提取质粒DNA，进行DNA序列分析，获得新的DNA序列（SCAR)；

图6引物对LY2-1在不同桂圆样本中的特异性扩增与检测。样本1、2、3、4、5、6、8、9和14为采自位于长江上游四川合江的不同的青果；样本LZ、GD、GX、HN、FJ分别为采自四川泸州、广东、广西、海南和福建来源的桂圆品种，均获得特异性DNA扩增片段；DD为紫花地丁；JGT为沟景天；GHC为采自四川古蔺的赶黄草；JYH为金银花；TM为采自四川凉山的天麻。M:为天根公司的DL600的DNA分子大小标记，大小为bp；