[发明专利]胞内脂肪酶产生菌及其应用及筛选方法及使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物科学领域，特别是一种胞内脂肪酶产生菌及其应用及筛选方法及使用方法。 

背景技术

1, 3-甘油二酯是甘油的1, 3位羟基与脂肪酸相连形成的甘油二酯，它是油脂的天然成分，其口感、色泽、风味与普通甘油三酯无异，更重要的是1, 3-甘油二酯在人体内的吸收代谢方式和甘油三酯及1, 2-甘油二酯的不同。甘油三酯和 1, 2-甘油二酯均为经消化酶消化后生成单甘酯和游离脂肪酸，二者吸收进入血液后，很大部分重新合成甘油三酯。而 1, 3-甘油二酯经消化酶作用后生成甘油和游离脂肪酸，二者在体内转化成能量。所以食用1, 3-甘油二酯可以降低内脏脂肪、抑制体重增加、减少血脂等作用，因而是理想的健康油脂。作为天然油脂的替代品，1,3-甘油二酯可以有效预防主要因肥胖而引起的多种疾病，如高血压、冠心病、脑血管疾病、糖尿病、高脂血症、高尿酸血症、胆囊炎等。而且1, 3-甘油二酯还被进一步应用于含脂质食品、合成结构甘油三酯、作为医药中间体合成的原料等。所以对1, 3-甘油二酯的研究受到广泛的关注。 

1, 3-甘油二酯虽是油脂的天然成分，但其含量很低，所以开辟新途径制备1, 3-甘油二酯非常重要。合成1, 3-甘油二酯的方法有化学法和生物法。用化学法获得1, 3-甘油二酯，其缺点是要用到有毒有害的催化剂，对环境不友好，与人们对绿色食品的日益渴求相冲突。用生物脂肪酶法获得1, 3-甘油二酯因其绿色健康，符合人们对高品质食品的日益追求，将是发展的一个趋势。而且国内还未有全细胞脂肪酶非水相合成1,3-甘油二酯的报道。产胞内脂肪酶可用做全细胞脂肪酶催化剂，可省却酶的提纯和固定化，因此可简化工艺节约成本，有利于推动其产业化应用。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种胞内脂肪酶产生菌及其应用及筛选方法及使用方法，它用于脂肪酶有机相中合成1,3-甘油二酯，合成方式简单，反应的目的产物选择性高。 

本发明的是这样实现的：胞内脂肪酶产生菌，所述的菌株保藏编号为CCTCC No. M2012538。 

胞内脂肪酶产生菌在高选择性合成1,3-甘油二酯的应用。 

胞内脂肪酶产生菌的筛选方法，先从富油土壤采样，将样品中的胞内脂肪酶产生菌经富集培养后，采用橄榄油乳化液为底物，经过富集培养后稀释涂布在固体罗丹明B选择培养基上，以微生物分解橄榄油的能力作为初筛指标，挑取具荧光圈的菌落在平板上三区划线纯化，纯化后挑取单菌落移接斜面培养基保存，从而实现初筛；之后摇瓶发酵复筛，以微生物菌体制得的酶制剂于有机相中催化1,3-甘油二酯合成的薄层结果为第一次复筛指标；再以微生物菌体制得的酶制剂于有机相中催化1,3-甘油二酯合成的高效液相检测得率为第二次复筛指标。 

所述的富集培养所采用的富集培养基，按重量份数计算，包括(NH₄)₂SO₄ 0.05～0.5份，NaNO₃ 0.01～0.2份，NaCl 0.05~0.6份，MgSO₄ 0.01～0.2份，K₂HPO₄ 0.001～0.03份，橄榄油0.5～2份，pH为 6～8。 

所述的固体罗丹明B选择培养基，按质量百分比浓度计算，包括葡萄糖0.2～2%，可溶性淀粉 0.3～3%，蛋白胨 0.1～4%，酵母浸出汁0.1～5%，K₂HPO₄ 0.01～1%，MgSO₄·7H₂O 0.01～1%，NaNO₃ 0.1～4%及琼脂粉2%，pH为6～8；向上述混合溶液中加入聚乙烯醇-橄榄油乳化液9～14ml，灭菌，冷却至60℃后加入过滤除菌的浓度为1～3mg/ml罗丹明B 1～4ml。 

胞内脂肪酶产生菌的使用方法，将菌体冷冻干燥后制得全细胞脂肪酶酶制剂，将全细胞脂肪酶酶制剂用于有机相中反应高选择性合成1,3-甘油二酯；有机相反应为甘油三酯与甘油的甘油解反应，或甘油与脂肪酸的酯合成反应。也可用于催化其它的酯合成、酯水解、酯交换等。