[发明专利]一种核酸检测试剂盒和多生物素信号放大检测核酸的方法有效
申请号: | 201310183261.7 | 申请日: | 2013-05-17 |
公开(公告)号: | CN103276066B | 公开(公告)日: | 2017-04-12 |
发明(设计)人: | 李先强;姜昕 | 申请(专利权)人: | 武汉中帜生物科技有限公司;深圳市宏信生物技术有限公司 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68 |
代理公司: | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙)42222 | 代理人: | 汪俊锋 |
地址: | 430075 湖北省武汉市东湖技*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 核酸 检测 试剂盒 生物素 信号 放大 方法 | ||
1.一种核酸检测试剂盒,其特征在于,包括捕获分子和捕获桥分子,所述捕获分子为寡核苷酸,包被于固相上;所述捕获桥分子为DNA,一端能与捕获分子部分杂交,另一端能与待测核酸靶分子部分杂交;
还包括放大桥分子和放大分子,所述放大分子包括载体分子和标记分子,所述载体分子为DNA或RNA,所述标记分子为生物素标记的多核苷酸,一个载体分子通过多核苷酸与多个生物素分子相连;所述放大桥分子为DNA,一端能与待测核酸靶分子部分杂交,另一端能与载体分子部分杂交。
2.根据权利要求1所述的核酸检测试剂盒,其特征在于,所述的待测核酸为DNA或RNA。
3.根据权利要求1或2所述的核酸检测试剂盒,其特征在于,所述的载体分子通过多核苷酸与2-100个生物素分子相连。
4.根据权利要求1或2所述的核酸检测试剂盒,其特征在于,所述的载体分子通过化学合成或生物合成。
5.根据权利要求1或2所述的核酸检测试剂盒,其特征在于,所述的多核苷酸由15-50个一种或多种核苷酸组成。
6.根据权利要求1或2所述的核酸检测试剂盒,其特征在于,所述的放大桥分子为多个不同DNA或RNA。
7.根据权利要求1或2所述的核酸检测试剂盒,其特征在于,还包括杂交液、杂交洗液、封闭液和标记物标记的链霉亲和素或亲和素。
8.使用权利要求1所述试剂盒检测核酸的方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)将待测核酸与放大桥分子、捕获桥分子一起加入到固相上进行杂交,50℃孵育12-16小时,待测核酸通过捕获桥分子与预包被在固相上的捕获分子的特异识别而捕获到固相上;
(2)洗去未结合于固相上的核酸分子和放大桥分子、捕获桥分子,将放大分子加入到固相上,50℃孵育1小时;
(3)将标记物标记的链霉亲和素或亲和素加入到固相上,室温孵育半个小时;
(4)通过链霉亲和素或亲和素上的标记物的特征反应,实现核酸信号的二次放大和检测。
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