[发明专利]一种草莓茎尖组织初代培养方法

权利要求书

1.一种草莓茎尖组织初代培养方法，其特征在于包括如下步骤：

1）匍匐茎的采集：匍匐茎采集时间为4-7月，选取顶端处于未展叶和第一张展叶之间、生长健壮的匍匐茎；

2）匍匐茎处理：将采集的匍匐茎清洗、消毒后，在3-8℃下低温处理，处理时间72小时；

3）消毒与接种：消毒和接种均在超净工作台内进行，具体如下：

3.1消毒：

3.1.1将上述处理的匍匐茎，从顶部开始剪取5-8cm；

3.1.2用75%的酒精消毒15-20秒；

3.1.3有效氯浓度为1%的次氯酸钠溶液，消毒5-10分钟；

3.1.4灭菌水清洗后，备用；

3.2接种：

3.2.1外植体的摘取：在解剖镜下由外向内依次剥除生长点外围包裹的叶片，直到生长点暴露；

3.2.2用解剖针针尖挑取生长点上部组织，接种到培养基中：

培养：接种好的外植体在20℃下，暗下培养72小时，然后再放置于光下培养，培养条件25℃，2000lx，16hr ；培养10-15d形成芽体，20-30d展叶、生根，50-60d植株大小为3-5cm时，完成初代培养；所述培养基的组成是：MS +NAA（0.1-0.3mg/L）+BA（0.2 -0.5mg/L）+蔗糖（3%）+琼脂（8%），pH为5.8-6.0。

2.如权利要求1所述草莓茎尖组织初代培养方法，其特征在于：步骤1）中匍匐茎的采集长度为10-15cm。

3.如权利要求1所述草莓茎尖组织初代培养方法，其特征在于：步骤2）中的消毒是用400倍84消毒液浸泡匍匐茎10-15分钟，再用蒸馏水冲洗10-15分钟，前述400倍是指用水按400：1的体积比稀释84消毒液。

4.如权利要求1所述草莓茎尖组织初代培养方法，其特征在于：步骤3）中用灭菌水清洗3-5次。

5.如权利要求1所述草莓茎尖组织初代培养方法，其特征在于：步骤3）中，所述解剖镜的放大倍数为10-40x。

6.如权利要求1所述草莓茎尖组织初代培养方法，其特征在于：步骤3）中，所述解剖针针粗度Φ为0.2-0.4mm，针尖所取生长点组织不超过针的粗度。

7.如权利要求1所述草莓茎尖组织初代培养方法，其特征在于：步骤3）中，所述初代培养时培养容器为试管Φ=2.5cm，每管培养基加入量为20-25ml。