[发明专利]生姜药材的UPLC指纹图谱构建方法及其标准指纹图谱

说明书

技术领域

本发明设计了中药材指纹图谱的构建方法，尤其是生姜药材超高效液相色谱（UPLC）指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱，属于药物分析技术领域。

背景技术

中药是多组分的复杂体系，其化学成分种类丰富，同时其质量又会受到中药产地，品种，运输，炮制加工等诸多方面的影响，所以对中药及其制剂的质量控制的研究一直是中药及其制剂现代化和走向国际的瓶颈，一直是中药及其制剂研究的一个重中之重，同时也是一个难点。中药指纹图谱技术现在是国际社会公认的用来鉴别中药品种和质量控制的最有效，最准确，最直接的方法手段。该技术主要通过不同的特征共有峰来标示药材的成分，可基本上反映中药的整体化学成分分布以及含量情况。

伴随着更多更新的仪器的出现和发展，中药指纹图谱技术开始向纵向快速发展，技术种类越来越多，应用范围越来越广。日趋完善的中药指纹图谱技术包括：TLC法指纹图谱技术、GC法指纹图谱技术、HPLC法指纹图谱技术等。其中高效液相色谱( HPLC)具有对样品挥发度和热稳定性的限制小，柱效高、选择性高、灵敏度高、重复性好等优点，适合用于中药复杂体系的分析，在中药指纹图谱研究中应用的最为广泛；而超高液相色谱技术（UPLC）较普通的HPLC而言，具有分析时间短、灵敏的高、重现性好，节省溶剂等优势，近年来在中药指纹图谱研究中的应用也越来越多。

生姜为姜科植物姜(Zingiber officinale Rosc.)的新鲜根茎，具有解表散寒、化痰止咳、温中止呕、解鱼蟹毒等功效。生姜可以入药、腌制食用，同时又是重要的调味品，是药食同源的最佳范例。生姜在我国有悠久的药用和食用历史，早在春秋时期的《论语·乡党》一书中就有孔子“不撤姜食,不多食”的记载。生姜产地广泛，我国大部分地区均有出产，南方以广东、浙江栽培较为普遍，其次是江西、安徽、四川、云南、湖南、湖北等省；在北方则以山东为主要产地，还有河南、陕西等省栽培较多。药材的质量与产地的气候、土壤、阳光、水分等自然条件和生长环境密切相关，这些因素不仅影响着药材的生长发育和分布，而且影响其外部形态、内部构造和生理变异以及有效成分的形成和含量。目前生姜药材质量控制与品质评价的方法主要侧重于单一或几种成分的含量测定，不能全面说明其质量状况，需要能为全面评价生姜质量的技术方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种生姜的UPLC指纹图谱的建立方法，以及由此方法所得到的生姜药材标准指纹图谱。为达到此目的，本发明通过对生姜的超高液相指纹图谱的研究，提出了一种生姜药材的质量控制方法，弥补了现有质量控制技术的不足，使生姜药材的质量控制更加全面和科学。

本发明的生姜UPLC指纹图谱建立方法，包括如下步骤：

供试品溶液制备：精密称取生姜1.25g左右 (按《2010版（附录Ⅷ）项下水分测定法，以甲苯法测定含水率)，置10ml容量瓶中，加入甲醇至刻度，超声（150W，40Hz）25min，放冷，称量，加甲醇补足失重量，摇匀，0.22μm滤膜滤过，取续滤液，即得。

指纹图谱的制备：采用超高液相色谱系统，色谱分离柱为UPLC色谱柱，填料为BEHC18柱(2.1 mm×100 mm，1.7μm)；乙腈(A)-水溶液(B)为流动相，梯度洗脱（程序为A-B:0～10min，3:97；10～15min，85:15；15～18min，100:0；18～20min，97:3），检测波长为280nm，流速为0.35mL·min^-1，柱温为35℃。在此条件下分析供试品溶液，得到生姜药材的超高液相指纹图谱。

标准指纹图谱的确定：确定了16个共有特征峰，其保留时间分别为：2.7 mi n、7.3 min、8.9min、9.2min、9.6min、10.2 min、10.4 min、11.4 min、12.1 min、12.4min、12.7 min、13.2mi n、13.7 min、13.9 min、16.2min、17.9min，这些共有UPLC特征峰构成了生姜药材的指纹特征，作为可作为生姜药材的标准指纹图谱。

本发明有以下优点和用途：

（1）将生姜药材作为整体对待，通过比较其共有峰，可以找出不同产地、批次和不同炮制品药材之间的细微差异。

（2）供试品溶液制备方法简单，色谱条件容易实现。

（3）方法的稳定性，重现性较好，采样时间短。

（4）适用于生姜药材真伪，质量、产地等鉴别和控制。

附图说明：

图1 是本发明提供的生姜药材的标准指纹图谱，从左到右分别标示出其16个共有色谱峰。