[发明专利]一种从酸浆属植物中提取纯化总酸浆苦素的方法

说明书

技术领域

本发明属天然产物的提取、富集、纯化方法，主要涉及一种从酸浆属植物中提取、富集、纯化总酸浆苦素的方法。

背景技术

酸浆苦素（physalins）是存在于酸浆属（Physalis）植物（如小酸浆（Physalis minima ）、酸浆（Physalis alkekengi）、苦蘵（Physalis angulata）等）中的一类13,14-裂环-16,24-环麦角甾烷类化合物，因为其多氧结构（C28H30–34O9–12）的存在，在睡茄交脂甾体化合物中，physalins属于在生源上氧化水平最高级的一组。1969年，T．Matsuura等人首次从酸浆中分离并鉴定了酸浆苦素A（physalin A）和酸浆苦素B（physalin B），自此以后，研究工作者先后从酸浆属植物中分离得到多个新的physalins，至今为止，人们已发现30余个此类型的化合物。药理实验表明，physalins对体外肝癌HA22T细胞、宫颈癌HeLa细胞、鼻咽癌KB细胞、结肠癌Colo-205细胞、肺癌Calu-1细胞以及白血病等多种肿瘤细胞均具有较好的抑制活性，且剂量与作用成正相关；physalins能够抑制巨噬细胞激活，并降低淋巴细胞的活性从而起到免疫调节作用；此外，physalins 还具有抗炎、抗利什曼原虫、抑菌、抗疟疾等药理活性。Physalins以其独特、新颖的化学结构以及多方面的药理活性已经引起药学界的高度重视。

目前，对于用整套的技术用于富集、纯化酸浆属植物中总酸浆苦素的方法并不多见。专利CN 200510017168.4公开了一种长白山锦灯笼(酸浆宿萼)抗炎药物及其制备方法，该专利仅报道了从锦灯笼中得到酸浆苦素的方法，未涉及酸浆属的其它植物，该方法将水提液直接用大孔树脂分离，不利于大孔树脂的回收利用，且纯化工艺粗糙，所得酸浆苦素富集物的杂质含量高，纯度有待进一步提高。专利 201210119268.8公开了一种酸浆苦素B的制备方法，该方法是以酸浆地上部分为原料，采用超临界萃取的方法，萃取物以氯仿溶解，加入硅胶搅拌后，低温干燥，装柱，以氯仿-甲醇梯度洗脱，收集酸浆苦素B对应流分，回收溶剂得酸浆苦素B产物。该方法采用超临界萃取的方法作为提取方法，并且涉及氯仿、甲醇等毒性大的有机溶剂，不但污染环境、成本昂贵，且不易实现工业化生产。

发明内容

本发明的目的是针对现阶段富集和纯化总酸浆苦素方法的不足，提供一种从酸浆属植物中提取纯化总酸浆苦素富集物的工艺，并建立总酸浆苦素富集物的质量评价方法。

根据本发明的技术思路，以酸浆属植物为原料，将其粉碎，称量过后加水加热回流提取，合并提取液，加压浓缩至一定体积，加乙醇至一定的醇浓度，进行醇沉，待醇沉完毕后减压抽滤，滤液减压浓缩至乙醇全部蒸出，剩余提取液经大孔树脂D 101层析纯化，收集40%-70%的乙醇洗脱部位，减压蒸干，即得总酸浆苦素富集物。以所得总酸浆苦素富集物为分析对象，运用HPLC-DAD-MS/MS技术建立分析其中酸浆苦素类化合物的定性指纹图谱分析方法。本发明针目前对酸浆苦素富集、纯化研究的不足，提出了一整套可以有效富集、纯化酸浆属植物中总酸浆苦素的富集纯化方法，并且建立了所得总酸浆苦素富集物的定性分析方法及指纹图谱。本发明不仅为酸浆苦素及其相关药物的进一步开发提供了物质载体，为总酸浆苦素富集物的质量评价提供了分析手段，并且为其深入研究提供了强有力的理论依据。 

本发明的具体步骤如下：

（1）取粉碎过的锦灯笼（或其它酸浆属植物如酸浆、小酸浆、苦蘵等），加入10-15倍量的水热回流提取，提取时间为1.5-2.0 h；

（2）将提取液浓缩后加入乙醇进行醇沉，加入后溶液的醇浓度为70%-80%，醇沉液抽滤、滤液减压浓缩至无醇后，剩余提取液经大孔树脂D 101层析纯化，乙醇水为洗脱溶剂洗脱，洗脱梯度：20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、95%（体积比），收集40%-70%的乙醇洗脱部位，减压蒸干，即得总酸浆苦素富集物。

（3）总酸浆苦素富集物的定性分析