[发明专利]一种检测土壤中痕量井冈霉素A的方法

权利要求书

1.本发明提供了一种检测土壤中痕量井冈霉素A的方法，具体操作步骤如下：

(1) 提取：称取40.0 g含有0.05~1.00 mg/kg井冈霉素的土壤样品，以40 mL缓冲溶液超声提取15 min 后，经过布氏漏斗减压抽滤或离心15 min，再分别用30 mL、30 mL缓冲液洗涤残渣、抽滤瓶或离心管，合并清液，用盐酸或氢氧化钠调节提取液的pH值；

(2) 富集：量取30 mL经过预处理的阳离子交换树脂于玻璃层析柱中，以60 mL pH 3.5的磷酸盐缓冲液平衡后，将提取液上样于层析柱中进行吸附富集；

(3) 去杂：分别用pH 3.5的磷酸盐缓冲溶液和乙醇淋洗去除杂质；

(4) 洗脱：用60~175 mL 洗脱剂进行洗脱；

(5) 净化：将步骤(4)的洗脱液以不高于60℃的温度，在旋转蒸发仪上浓缩至约30 mL，加入10 g 左右非极性大孔吸附树脂振摇，过滤，用20 mL pH 7.0的磷酸盐缓冲液洗涤树脂2次，过滤，合并滤液，在60℃下旋蒸近干，再用氮气或空气吹干，定量加入2.00 mL pH7.0的 Na₂HPO₄-KH₂PO₄缓冲溶液超声溶解；

(6) 检测：将样品溶液按下述色谱操作条件进行检测：LC-10Atvp型高效液相色谱仪，色谱柱：Aligent C₁₈ plus柱，流动相：甲醇：pH7.0的Na₂HPO₄-KH₂PO₄缓冲溶液体积比2：98，流速：0.6 mL/min，检测波长：210 nm，柱温：35℃，进样量：20 μL；

(7) 回收：将使用过的阳离子交换树脂和非极性树脂经过5％HCl和5％NaOH处理后回收再利用。

2.根据权利要求1的方法，步骤(1)中所述的缓冲溶液为浓度0.05~0.2 mol/L的磷酸盐缓冲溶液，pH值为6.0~9.0；离心速度为3000~15000 r/min；清液的pH值为2.5~7.5。

3.根据权利要求1的方法，步骤(2)中所述的阳离子交换树脂为D072大孔强酸性阳离子交换树脂，提取液上样速度为0.3~1.0 mL/min。

4.根据权利要求1的方法，步骤(3)中所述pH 3.5磷酸盐缓冲溶液浓度为0.01~0.1 mol/L，所用体积为60~200 mL，乙醇体积为60~200 mL，淋洗速度为0.5~1.0 mL/min。

5.根据权利要求1的方法，步骤(4)所述洗脱剂是选自以下溶剂中的一种：1 mol/L氨水，1.5 mol/L氨水，2 mol/L氨水，1 mol/L氨水：乙醇＝1:1，2:1，3:1和4:1 (均为体积比)，洗脱速度为0.5~1.0 mL/min。

6.根据权利要求1的方法，步骤(5)中所述的非极性大孔吸附树脂为X-5 ，使用前用5%HCl、5%NaOH、丙酮和乙醇进行预处理，振摇时间为20 min~1 h。