[发明专利]中药材中生物碱的提取分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药提取、分离领域，具体地，涉及一种中药材中生物碱的提取分离方法。

背景技术

生物碱是植物中含氮的碱性有机化合物，大都有明显的生理活性，所以常常是很多中草药的有效成分。生物碱大多数来自植物界，以罂粟科、豆科、防己科、毛莨科等科的植物中分布较多。生物碱含量一般都较低，大多少于1%，长春花中的长春新碱含量只有百万分之一。一种植物中往往含有几种或几十种生物碱。因此，提取出来的总生物碱还需进一步分离，去除杂质、排除干扰物，保证分析结果的准确性。

目前为了能提高分离效率，在分离生物碱总提取物前应选用薄层色谱（Thin Layer Chromatography，简称TLC）和纸色谱（paper chromatography，简称PC）色谱法对其进行初步分析，以判断总碱中所含生物碱数量与极性大小，然后考虑选用适当分离方法。在选择这些分离方法时，应尽量根据生物碱性质不同来选择分离手段，如：一、pH梯度萃取法。总碱中强碱性的生物碱在加弱酸时可形成稳定的盐而溶解，弱碱性生物碱则需相对强的酸才能形成稳定的盐溶于水，整个过程就如形成一个酸性从弱到强的梯度，则可以把碱性从强到弱的游离生物碱分离开来。对总碱盐则需形成一个碱性从弱到强的梯度，把生物碱盐按游离碱碱性从弱到强分开；二、利用生物碱及其盐的溶解度不同进行分离。总碱中某些生物碱在同种有机溶剂中的溶解度不同，这类生物碱可用此方法分离；三、利用生物碱的极性差异进行分离。当生物碱之间碱性差异不大而极性差异较大时，可以根据它们在特定极性的溶剂中溶解性不同，将它们分离开来。四、利用生物碱特殊功能基的性质进行分离，含酚羟基的生物碱显弱酸性，可与强碱（NaOH）成酚盐而溶于水。含羧基的生物碱可与弱碱（NaHCO₃）成盐而溶于水。有些可与醇生成酯从水中析出，有的有内酯或内酯胺环的生物碱可加热碱，开环溶于水，加酸环合后再析出。

色谱法利用混合物组分在固定相中吸附和分配系数的微小差别，达到各组分彼此分离的目的。优点是分离效率高，它能把各种性质极相似的组分彼此分离，而后分别加以测定，因而是一类重要、常用且发展最快的分离手段；对于那些用传统的分离方法难以分离的物质以及热敏性物质，该方法具有明显的优越性。色谱的吸附剂常用硅胶、氧化铝、纤维素、聚酰胺等。用碱性流动相的反相高压液相色谱对结构相近的生物碱常有较好的分离效果。硅胶本身具有酸性，对生物碱的吸附力较强，用中性展开剂进行展开时，Rf值很小，有时出现拖尾，因此常用碱性的展开剂，如有机溶剂氯仿、丙酮、苯中加入适当的乙二胺或氢氧化铵。而氧化铝稍显碱性，不会引起生物碱的化学变化，但对极性大的生物碱吸附较强，难以分离，故氧化铝主要用于分离亲脂性生物碱。

但以上方法普遍存在操作繁琐，分离效率低、通用性差等缺点，目前的色谱分离方法一般忽视了强极性部分的生物碱。因此，若能克服上述问题，开发出一种全新的中药材中生物碱的提取分离方法，势必会有巨大的应用前景与经济价值。

发明内容

为了克服现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种中药材中生物碱的提取分离方法。

为了实现上述目的，本发明提供的中药材中生物碱的提取分离方法，包括以下步骤：

1）将中药材用醇溶剂进行提取，得到中药材提取物；

2）将中药材提取物过ODS柱（十八烷基键合多孔硅胶柱），收集在前5分钟流出的溶液；

3）再将上步收集得到的溶液过硅胶键合了C18和阳离子交换基团的混合填料的色谱柱，对该色谱柱进行梯度洗脱，得到分离出来的生物碱。

其中，步骤1）中，将中药材用醇溶剂进行两次回流提取、过滤（首次回流提取，过滤；滤渣用醇溶剂再次进行回流提取，过滤），合并两次滤液，减压浓缩即得中药材提取物。

其中，步骤1）中，所述醇溶剂为乙醇或甲醇溶剂，优选甲醇。

其中，步骤1）中，将中药材用醇溶剂进行两次回流提取的条件相同，具体包括：

醇溶剂均用酸调pH至2.0～4.5，优选3.0。

醇溶剂的用量均为所提取物料（未经提取的中药材及经过首次提取后过滤的滤渣）的重量的8～15倍，优选10倍。

醇溶剂的浓度均为50～70%，优选60%（质量比）。进一步地，调醇溶剂pH值的酸为：甲酸或乙酸。

两次回流提取的提取时间均为：0.8～1.2小时，优选1小时。

其中，步骤2）中，用酸调过ODS柱所用洗脱剂的pH值至2.0～4.5，优选3.0。