[发明专利]一种临床级人间充质干细胞无血清完全培养基

说明书

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种人间充质干细胞培养基。

背景技术

干细胞(stem cells，SC)是一类具有自我复制能力(self-renewing)的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞，可用于治疗白血病、先天性代谢疾病、某些实体肿瘤、糖尿病、心脏病和脑瘫等多种疾病，具有非常广阔的医疗用途，截止2012年12月，全球已开展了4178项干细胞临床实验研究，进入临床三期的项目多达602项。间充质干细胞(MSC)是目前在治疗方面最为安全有效和应用广泛的成体干细胞，主要来源于骨髓、脂肪、脐带、胎盘、羊膜等。截止2013年4月，在世界范围内已经批准上市7种干细胞临床治疗产品，有5种为间充质干细胞来源。伴随着干细胞治疗快速发展，开发一种临床级的间充质干细胞培养基至关重要。

临床级干细胞培养基首先避免使用动物来源血清。动物来源血清中存在潜在病毒感染的风险，且血清成分复杂，不容易定性研究每种成分对干细胞生长、分化的作用，且容易引起过敏反应。

目前，市场上非常多的间充质干细胞培养基产品，缺点：1、使用动物来源血清，增加了病原体，异种抗原，批次间不稳定性。美国FDA正考虑禁止使用胎牛血清用于细胞治疗；2、干细胞容易分化，不能长期保持干性。3、未经过全套第三方病原体检测(14项检测)，不能提供全套第三方病原体检测的报告，培养的细胞存在病原体污染风险，没有达到临床级别。4、市场上可以购买到几种人间充质干细胞无血清培养基，但均为国外进口，且价格昂贵，每500ml价格在3000元以上，但培养效果却不甚理想，干细胞增值速度以及培养后干细胞表面标记物的表达均不理想。且仅供研究应用，不能用于人的诊断及治疗。

发明内容

本发明的目的是解决现有的间充质干细胞培养基存在的上述问题，提供一种临床级人问充质干细胞无血清完全培养基。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种临床级人间充质干细胞无血清完全培养基，在基础培养基中添加有以下组分，各组分终浓度分别为：人血清白蛋白1～2g/L、转铁蛋白5～10mg/L、纤粘连蛋白2～8mg/L、层粘连蛋白1～4mg/L、Fe(NO₃)₃·9H₂O50g/L、FeSO₄·7H₂O417g/L、雌二醇1～3μg/L、睾酮2～5μg/L、孕酮1～3μg/L、地塞米松39.25～117.74μg/L、胰岛素5～10mg/L、核黄素376.36mg/L、辅酶A80.96～242.87mg/L、丁二胺4.41～6.17mg/L、牛磺酸1～2mg/L、氨基乙醇0.61～1.85mg/L、丙酮酸8.81～26.42mg/L、硒酸钠3.78～7.56μg/L、L-谷氨酰胺292.3～584.6mg/L、血管内皮生长因子(VEGF)2～8μg/L、表皮生长因子(EGF)4～10μg/L、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)4～10μg/L、白血病抑制因子(LIF)1～5μg/L、胰岛素样生长因子-I(IGF-I)1～5μg/L、干细胞因子(SCF)2～8μg/L组成。

所述基础培养基为DMEM/F12。

所述的临床级人间充质干细胞无血清完全培养基还包括：终浓度为0.5～2.5μg/L的血小板源性生长因子AB。

所述的临床级人间充质干细胞无血清完全培养基还包括：终浓度为1～4μg/L的转化生长因子α，和/或终浓度为1～4μg/L转化生长因子β。

所述的临床级人间充质干细胞无血清完全培养基还包括：终浓度为0.5～2.5μg/L的肿瘤坏死因子α。

所述的临床级人间充质干细胞无血清完全培养基还包括：终浓度为0.5～2.5μg/L的白细胞介素2(IL-2)。

所述的临床级人间充质干细胞无血清完全培养基还包括：终浓度为0.5～2.5μg/L的促红细胞生成素。

所述的临床级人间充质干细胞无血清完全培养基还包括：终浓度为35.74～71.48ng/L的甲状旁腺激素。

所述的临床级人间充质干细胞无血清完全培养基还包括：终浓度为0.36～1.09mg/L的氢化可的松。

所述的临床级人间充质干细胞无血清完全培养基还包括：终浓度为88.07～352.26mg/L的维生素C。

所述的临床级人间充质干细胞无血清完全培养基还包括：终浓度为10～30mg/L的非必需氨基酸。