[发明专利]一种乌贼墨抗前列腺癌多肽及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，特别涉及一种乌贼墨抗前列腺癌多肽的制备方法。

背景技术

乌贼属于软体动物门头足纲乌贼目乌贼科。像其他的头足类一样，通过喷射黑色的墨汁防御外敌，乌贼的营养丰富，除可食用外，还具有很好的药用价值。尤其是乌贼的墨汁，早在《本草拾遗》中就有“腹中墨，主治血刺心痛”的记载。乌贼墨囊一般是作为废弃物。上世纪90年代，日本学者（Sasaki J,Ishita K,Takaya Y,et al.Anti-tumor activity of squid ink[J].Journal of Nutritional Science and Vitaminology,1997,43(4):455）从乌贼墨中分离出一种具有很好抗肿瘤作用的提取物。然后，乌贼墨逐渐成为研究者的关注热点，近年来，乌贼墨中的提取物所具有的功能活性被研究者们广泛开发，研究。比如，抗氧化、降血压、抗菌性、抗溃疡等等。科学家们对其抗肿瘤活性进行研究，发现其具有多种抗肿廇机制，比如乌贼墨有提高免疫功能，诱生细胞因子，诱导癌细胞凋亡，抑制癌细胞生长的作用等等。在国内研究乌贼墨抗肿瘤作用的学者有很多，我们可以参考《中国药师》2003 年第 6 卷第 10 期，李孝东和袁建华所著的“乌贼墨抗肿瘤机制研究进展”，《中国海洋药物杂志》2012 年第 31卷第 5期，张倩和张建民所著的“乌贼墨抗肿瘤活性研究进展”。这些充分显示了乌贼墨在抗肿瘤药物开发具有十分显著的潜在价值，因此挖掘其潜在的药用价值对充分利用海洋资源、扩大药源也有深远意义。 

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种乌贼墨抗前列腺癌多肽，对前列腺癌PC-3细胞有明显的增殖抑制作用，具有较好的医学应用价值。

本发明的目的之二在于提供一种乌贼墨抗前列腺癌多肽的制备方法，安全性好，反应条件温和，过程控制容易，所得乌贼墨抗前列腺癌多肽纯度高，对前列腺癌PC-3细胞有明显的增殖抑制作用，具有较好的医学应用价值。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是： 

一种乌贼墨抗前列腺癌多肽，所述乌贼墨抗前列腺癌多肽的氨基酸序列为序列表中的SEQ ID No.1。

SEQ ID No.1：LKYYDDESTQHGAKRMVPYKIFLNRAATRG。

一种乌贼墨抗前列腺癌多肽的制备方法，所述的制备方法步骤如下：

（1）将鲜乌贼墨原料匀浆得乌贼墨浆料；

（2）按照每克乌贼墨浆料加0-3ml超纯水的配比，将乌贼墨浆料与超纯水混匀，调节pH 2.0-3.5，按照每克乌贼墨浆料加300-1200U的加酶量加入胃蛋白酶，30-45℃酶解2-8小时得酶解液；

（3）酶解液灭活，离心，取上清液，经超滤获得分子量大于3kd小于等于5kd的活性组分；

（4）将分子量大于3kd小于等于5kd的活性组分经Sephadex G-25 层析分离，于280nm波长下检测，收集所得吸收峰，冷冻干燥；

（5）对得到的吸收峰进行体外抗肿瘤实验筛选，获得抗前列腺癌PC-3细胞增殖的抑制率最高的吸收峰即为乌贼墨抗前列腺癌多肽。

步骤（4）、（5）具体操作为：将分子量大于3kd小于等于5kd的活性组分用蒸馏水进行溶解，离心，取上清液，过 0.22μm 微孔滤膜，取滤液过 Sephadex G-25 柱，用蒸馏水为洗脱液，平衡和洗脱，于280nm波长下检测，得到三个峰，收集所得吸收峰，冷冻干燥，经体外抗肿瘤实验筛选，得到抗前列腺癌PC-3细胞增殖的抑制率最高的第二吸收峰，收集第二吸收峰。

作为优选，步骤（2）中按照每克乌贼墨浆料加1-3ml超纯水的配比。

作为优选，步骤（2）中40-45℃酶解4-8小时得酶解液。

本发明的有益效果是：安全性好，反应条件温和，过程控制容易，所得乌贼墨抗前列腺癌多肽纯度高，对前列腺癌PC-3细胞有明显的增殖抑制作用，且随着作用的时间和用药浓度的增加，抗前列腺癌细胞增殖的抑制率也明显增加，具有较好的医学应用价值。

附图说明

图1是分子量大于3kd小于等于5kd的活性组分的G-25凝胶层析色谱图；

图2是本发明乌贼墨抗前列腺癌多肽的高效液相图。

具体实施方式

下面通过具体实施例，并结合附图，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。