[发明专利]免疫原性组合物及其使用方法

说明书

本申请是分案申请，原申请的申请日为2006年10月25日、申请号为200680039703.9(PCT/US2006/041666)、发明名称为“免疫原性组合物及其使用方法”。

相关申请的交叉引用

本申请要求2005年10月25日提交的、申请号为60/729,828的美国临时申请的优先权，其全文通过引用合并于此。

技术领域

本发明涉及免疫原性组合物和使用该免疫原性组合物诱导脊椎动物产生免疫应答的方法。

背景技术

人们发现，对于某些疾病，机体先与免疫性感染制剂接触后，可抵抗以后的感染，自此之后疫苗一直在医学领域占据重要地位。多年来人们一直使用疫苗使个体产生抗病毒、细菌、真菌和寄生虫等特定病原体感染的免疫性，而且还使用疫苗刺激机体产生抗癌细胞上抗原或抗病理原纤维形成的免疫应答的能力。疫苗可以通过口服、静脉内、皮下、透皮、舌下、肌内和鼻内等各种给药方式使用。

早期疫苗制备依赖于仍然保留免疫原性的“活”或“死”的病原体。随着对特定病原体结构和功能及适应性免疫机制的深入了解，设计更安全可靠、靶向性更强的疫苗已成为可能。例如，目前使用的抗B型肝炎病毒疫苗仅仅只使用一部分病毒表面抗原接种，而不必使用整个病原体。使用这类疫苗不仅能降低副作用，而且能避免产生针对抗原的无益免疫应答，这种应答是非保护性应答，也就是说，不产生长期免疫力。另外，使用重组DNA技术和基因疗法，还研制出DNA疫苗，在有利情况下使机体产生保护性免疫应答。

使用蛋白质抗原（如病毒蛋白或肿瘤特异性抗原）或来源于蛋白质抗原的免疫原性多肽制备疫苗，是一种新型策略，因其毒性低、应用广泛而有巨大的临床潜力。但是，使用蛋白质疫苗获得成功的临床病例极为有限，部分原因在于该疫苗给药困难。所以，有必要开发制备工程多肽抗原的更有效方法。

目前正在评估合成肽疫苗抗细菌、寄生虫和病毒感染的保护功效。细菌表位疫苗包括抗霍乱和志贺氏菌感染的疫苗。疟疾合成疫苗已经通过I期和II期临床试验。流感和B型肝炎代表两类病毒系统，合成肽疫苗在这两类系统中的前景尤其看好，而且最近抗人免疫缺陷病毒-1（HIV-1）的合成疫苗的开发也备受关注。

疫苗中蛋白质或肽抗原刺激产生的有利的免疫应答包括体液介导的和细胞介导的免疫。体液部分涉及经刺激产生抗体的B细胞，而细胞介导的部分包括T淋巴细胞。细胞毒性T-淋巴细胞（CTLs）在细胞介导的免疫系统中发挥重要作用，可以使被病毒或细菌感染的细胞裂解。尤其是CTLs具有细胞表面受体，能识别与MHC-I类或II类分子有关的外来肽。

所以，需要开发适于将多肽等复合抗原释放到脊椎动物内的方法和专用释放平台。免疫原性多肽的工程技术和由免疫原性多肽制成的结构体有望满足这一需求。最好是，所得免疫原性决定簇的提呈将活化适应性免疫系统的至少某些组成，也就是说，抗原提呈将诱导产生足以抗击特定抗原的免疫应答，而无论该免疫应答是由抗体、细胞毒性T细胞、辅助性T细胞、天然杀伤细胞或巨噬体，还是由它们的某些组合介导。

发明内容

在一实施例中，免疫原性组合物包括含两层或两层以上聚电解质的多层膜，其中，相邻层含有相反电荷的聚电解质，第一层聚电解质包括抗原性多肽，该抗原性多肽含有与一个或多个抗原决定区共价连接的一个或多个表面吸附区。所述抗原性多肽和一个或多个表面吸附区具有相同的极性。所述一个或多个表面吸附区含有一个或多个氨基酸序列基元（motif），该基元由5-15个氨基酸构成，每个残基的净电荷数量大于或等于0.4。所述一个或多个抗原决定区含有3到约250个氨基酸残基。所述抗原性多肽不是均聚体，有至少15个氨基酸长，pH4-10时水溶解度大于50μg/mL。另外，第二层聚电解质包括分子量大于1,000、每分子至少5个电荷且电荷与第一层多肽相反的聚阳离子材料或聚阴离子材料。

在另一实施例中，诱导脊椎动物产生免疫应答的方法包含给所述脊椎动物给用上述免疫原性组合物。

附图说明

图1是带相反电荷多肽的组装体示意图。

图2是包含一个抗原决定区（3）和两个表面吸附区（1、2）的抗原性多肽，一个表面吸附区（1）与所述抗原决定区（3）的N-端连接，另一个表面吸附区（2）与所述抗原决定区（3）的C-端连接。

图3是利用水相合成法、固相合成法或多肽重组法独立制备的LBL抗原性多肽的三个不同区。

图4是将抗原性多肽（4）的三个区连在一起的过程。