[发明专利]日本血吸虫重组抗原SjPDI及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种日本血吸虫重组抗原及其制备方法和应用。

背景技术

血吸虫病是由血吸虫引起的一种重要人畜共患病，在热带和亚热带地区约有2亿人感染，在我国主要流行的是日本血吸虫病。截止到2011年，全国共有血吸虫病流行县(市、区)454个，血吸虫病人28.68万，全国实有钉螺面积372664.10hm2，较2010年增加了932.08hm2。我国血吸虫病防治工作仍面临挑战，形势不容乐观，因此，加强抗血吸虫疫苗候选分子和新药物靶标的筛选显得尤其重要。

在宿主体内，寄生虫组织结构和行为方式会发生变化，虫体移行于宿主体液和组织之间，由肠上皮和(或)表皮以及其他特异排泄分泌器官在整个生命周期释放或分泌的排泄分泌产物能引起宿主免疫调节反应。这些成分直接暴露于宿主免疫系统，诱导宿主的免疫应答，干扰宿主的免疫反应过程，使血吸虫可以逃脱宿主的免疫攻击，同时还是宿主体内存在活虫体的重要指征。血吸虫排泄分泌蛋白的重要功能及研究意义有：①排泄分泌蛋白含有一些重要的酶、信号传导蛋白、解毒分子，在血吸虫生长发育中发挥了重要的作用；②血吸虫排泄分泌蛋白的不断变化对血吸虫逃避宿主免疫攻击，在宿主体内存活、发育、繁殖中扮演着重要角色，在免疫逃避机制中起到了重要作用；③一些已呈现较好免疫保护效果的血吸虫疫苗候选分子，已证明在血吸虫排泄分泌产物中呈现；④由于排泄分泌蛋白暴露于宿主的免疫系统并引起宿主的免疫应答，一些排泄分泌蛋白已被证明是良好的血吸虫病诊断抗原。因此，对排泄分泌蛋白总成分的鉴定有利于理解血吸虫如何调节寄主免疫应答以建立慢性感染，以及与寄主相互作用机制。同时，这些信息有利于发现控制血吸虫病的疫苗候选分子、新的诊断试剂及新药物靶点。

蛋白质二硫键异构酶(Protein disulfide isomerase，PDI)被鉴定为一种排泄分泌蛋白，在二硫键形成过程中起关键作用。PDI属于硫氧还蛋白家族，基因含有两个独立的活性位点，每个活性位点包含两个半胱氨酸(WCGHCK)，PDI催化底物二硫键的形成及重排以形成有活性的天然结构。在肝片吸虫中，PDI保护虫体免受氧化压力的影响；在新孢子虫和弓形虫中，PDI在寄生虫-宿主相互作用中扮演重要角色。有关PDI的研究在日本血吸虫中还未被报道，因此，深入研究SjPDI的生物学功能及在血吸虫生长发育中的作用具有重要意义。

发明内容

本发明要解决目前缺乏抗血吸虫高效疫苗的技术问题，提供一种日本血吸虫重组抗原，该重组抗原包含日本血吸虫蛋白质二硫键异构酶(SjPDI)的SEQ ID NO.1所示氨基酸序列，具有良好的免疫原性，适于作为抗血吸虫病候选疫苗。

此外，还需要提供一种上述日本血吸虫重组抗原的制备方法和应用。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：

在本发明的一个方面，提供了一种重组载体，包含日本血吸虫PDI基因，该基因序列为编码SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的核苷酸序列。

优选的，所述重组载体的空载体为原核表达载体pET28a(+)，所述日本血吸虫PDI基因插入在空载体pET28a(+)的EcoR I和Sal I两个酶切位点之间。

更优选的，所述日本血吸虫PDI基因序列为SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。

在本发明的另一方面，还提供了一种日本血吸虫重组抗原，该重组抗原由上述重组载体经诱导表达制得。

本发明的日本血吸虫重组抗原，包含日本血吸虫的蛋白质二硫键异构酶氨基酸序列，还包含由部分载体序列表达的具有几个组氨酸的标签序列，该标签序列仅是便于后续的重组抗原蛋白纯化。

在本发明的另一方面，还提供了一种包含上述重组载体的宿主细胞。

在本发明的另一方面，还提供了一种上述日本血吸虫重组抗原的制备方法，包括以下步骤：

构建含日本血吸虫PDI基因的重组表达载体，所述基因是编码SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的日本血吸虫PDI基因，所述重组表达载体的空载体为原核表达载体pET28a(+)，所述日本血吸虫PDI基因插入在空载体pET28a(+)的EcoR I和Sal I两个酶切位点之间；

将所述重组表达载体转化入大肠杆菌宿主细胞；

培养包含重组表达载体的大肠杆菌宿主细胞，并在合适条件下，诱导该重组表达载体表达日本血吸虫PDI蛋白；

纯化重组表达的日本血吸虫PDI蛋白。