[发明专利]血管内皮细胞生长因子VEGF抗原表位的模拟短肽及其应用

说明书

技术领域

本发明属于一种血管内皮细胞生长因子VEGF抗原，特别涉及一种血管内皮细胞生长因子VEGF抗原表位的模拟短肽及其应用。

背景技术

VEGF是1989年Ferrara在牛垂体滤泡星形细胞体外培养液中首先纯化出来的一种相对分子量在34-42KD的同源二聚体蛋白。人类的VEGF基因结构位于染色体的6p21.3上，由8个外显子和7个内含子交替构成。根据其mRNA的剪切方式不同，可以产生5种不同的VEGF异构体，包括VEGF206、VEGF189、VEGF165、VEGF145和VEGF121。这5种VEGF的异构体均具有诱导内皮细胞增殖的活性，是一种有效的血管形成和通透性诱导因子，其差异主要在于它们与细胞表面以及细胞外基质中的肝素具有不同的亲和能力。

VEGF通过与其相应的VEGF受体结合来发挥作用。目前克隆出的VEGF受体主要有Fit-1和KDR/Flt-1两种，二者均具有酪氨酸激酶活性，是一种跨膜的糖蛋白，选择性的表达于内皮细胞表面，通过启动不同的信号通路来发挥生物学作用，即促进内皮细胞增殖、促进血管的形成以及血管通透性的增加等。

噬菌体展示技术(Phage Display Technology)是一种用于筛选功能性多肽或抗体的生物技术。Smith于1985年首次成功将外源基因通过基因工程手段插入丝状噬菌体基因组中，使表达的外源肽或蛋白与噬菌体外壳蛋白一起展示在噬菌体表面，从而建立了噬菌体展示技术。其原理是以噬菌体为载体，将外源核酸片段克隆至噬菌体外壳蛋白基因中形成融合，并以融合蛋白的形式表达于噬菌体表面，众多的融合型噬菌体便组成了噬菌体展示库。随后，用固定化的靶分子去筛选与之亲和的噬菌体。通过与特定的靶标反应，不能结合的噬菌体被洗脱掉，而能结合的噬菌体被保留下来并通过感染大肠杆菌得以扩增和富集，实现高通量筛选。它的优势在于将表现型与基因型直接联系在一起，确保能方便快捷的展示出目的蛋白以及该蛋白的基因序列。基于此，近年来在多肽序列鉴定、多肽模拟物的结构和功能的研究以及在人类病毒、细胞、肿瘤等多种生物靶组织多肽的研究方面，噬菌体展示技术发挥着重要的不可替代的作用。

研究表明，VEGF和其受体在许多肿瘤组织中有高表达，在乳腺癌、肺癌、大肠癌、胃癌、黑色素瘤、淋巴瘤、肉瘤、腺瘤等多种肿瘤组织内、外均可检测到大量的VEGF。原位杂交试验显示VEGF的mRNA主要分布在肿瘤细胞内，且肿瘤细胞也高度表达Flk-1，提示肿瘤局部存在自分泌和旁分泌机制促进血管生长。VEGF的表达程度与肿瘤的组织学类型、原发肿瘤的大小、有无血管或淋巴管转移等多种因素有关：肺腺癌组织中VEGF的表达程度显著高于鳞癌；VEGF高表达者，淋巴结转移和远处转移明显增高；低分化肿瘤患者的VEGF表达高于高分化者；VEGF阳性患者的复发率高、预后差、早期死亡率高。而肿瘤患者的年龄、性别、肿瘤生长部位等与VEGF表达无关。鉴于此，研究者们设想，如果能通过噬菌体展示技术得到一系列VEGF的相关表位序列，制成小分子多肽，为今后抗原肽疫苗的研发提供支持，在人体内产生专门针对VEGF的抗体，将会对人体内恶性肿瘤的治疗发挥巨大作用。

与传统化疗药物相比，多肽作为抗肿瘤化合物具有高选择性、低毒性、不产生耐药性的优点。同时，多肽长效化手段日益丰富，使得多肽在体内稳定性增加，半衰期延长。但是，大分子多肽还有可能引发机体的免疫应答，这大大限制了多肽药物的广泛运用。本发明所述的血管内皮细胞生长因子VEGF抗原表位的模拟短肽正是具有如上优点，在用于制备多肽疫苗、肿瘤血管生长抑制剂或者肿瘤导向药物等方面具有广阔的前景。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种血管内皮细胞生长因子VEGF抗原表位的模拟短肽。

本发明的另一目的在于提供所述血管内皮细胞生长因子VEGF抗原表位的模拟短肽的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种内皮细胞生长因子VEGF抗原表位的模拟短肽，其氨基酸序列为Seq NO.1，具体为Pro Ser Cys Val Pro Leu Met，即PSCVPLM；

所述血管内皮细胞生长因子VEGF抗原表位的模拟短肽的核苷酸序列如下所示：为Seq NO.2，具体为CCGTCCTGCGTTCCGCTGATG；

所述的血管内皮细胞生长因子VEGF抗原表位的模拟短肽在制备抗肿瘤药物中的应用。

所述的肿瘤为黑色素瘤、胃癌肿瘤或肝癌肿瘤。