[发明专利]高亲合力抗CD31/CD146双特异单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药体外诊断领域，具体涉及一种高亲合力抗CD31/CD146双特异单克隆抗体及其应用。

背景技术

CD31和CD146是循环内皮细胞表面的特异标志物。循环内皮细胞在血液中数量极少，在循环内皮细胞检测时需要高亲合力抗体来捕获，通常是利用抗CD146抗体来进行捕获。事实上抗体的亲合力在捕获过程中起着决定性的作用，但现有的商业上的抗CD146抗体，其特异性和亲和力相对不高，捕获血液中的循环内皮细胞的效率较低。在循环内皮细胞检测计数过程中，达到＞98％以上的捕获效率是决定结果正确性的关键因素。利用现有的市场上可买到的抗体很难到这一要求。如果要研发检测试剂盒，必须要有自主知识产权的高亲和力捕获抗体。另外，如果将两种特异标志物同时识别，能够广泛结合带任何一种或同时两种标志物的细胞，并易于形成免疫反应网络，提高捕获效率。

发明内容

本发明针对目前商业上抗CD146抗体其特异性和亲和力相对不高，捕获血液中的循环内皮细胞的效率较低的问题，本发明公开了一种高亲合力抗CD31/CD146双特异单克隆抗体及其应用，能显著增加捕获效率，可以被应用在循环内皮细胞检测系统中。

为解决上述技术问题，本发明通过以下技术方案实现：

一种高亲合力抗CD31/CD146双特异单克隆抗体，所述抗体对CD31和CD146同时具有特异性；

所述CD146的免疫抗原肽第341-390的序列为ERLNLSCSIP GAPPANFTIQ KEDTIVSQTQ DFTKIASKSD SGTYICTAGI；

所述CD31的免疫抗原肽序列为QTVESSGLYTLQSILKA；

将所述CD146的免疫抗原肽的第347位的半胱氨酸替换为亮氨酸，第386位的半胱氨酸替换为赖氨酸，利用所述免疫抗原肽获得高亲和力的抗CD146单克隆抗体；利用所述CD31的免疫抗原肽获得抗CD31单克隆抗体；将所述抗CD146单克隆抗体的Fab片段基因与所述抗CD31单克隆抗体的Fab片段基因克隆，并利用基因工程表达后，应用多肽链将单独的Fv(single chain Fv，scFv)片段结合形成单独的共价结构，制备出所述双特异性单克隆抗体。

进一步的，所述CD146氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1，所述CD31氨基酸序列如SEQ.ID.NO.2。

一种高亲合力抗CD31/CD146双特异单克隆抗体用于循环内皮细胞检测系统中的应用，利用所述抗体，可以与载体偶联后用于捕获血液中的循环内皮细胞。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

本发明通过构建抗CD31/CD146双特异单克隆抗体来作为今后捕获循环内皮细胞的工具。与现有的商业上的抗CD146抗体相比，本发明具有高特异性和高亲和力的特点，利用所述抗体，可以与载体偶联后用于捕获血液中的循环内皮细胞，可以应用于循环内皮细胞检测系统中。

在ELISA生物学实验中看到，该抗体的滴度可达到1∶64000(针对CD146抗原肽)和1∶32000(针对CD31抗原肽)。

ELISA生物学实验对比结果：