[发明专利]抗人和肽素单克隆抗体mcco1及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域，涉及抗人和肽素单克隆抗体mcco1及其应用。

背景技术

和肽素(Copeptin)是精氨酸加压素原C末端的39个氨基酸残基，相对分子质量为5000。和肽素和信号肽、精氨酸加压素(AVP)、神经垂体激素运载蛋白II共同组成前精氨酸加压素原，合成于下丘脑，再转运至垂体后叶贮存，和肽素与AVP等摩尔释放。和肽素在精氨酸加压素的成熟、转运以及对精氨酸加压素原的细胞内加工等方面起作用，参与机体的应激反应。应激反应可刺激AVP及和肽素的合成和释放，使血液水平明显升高。体内AVP水平的上升与心脑血管事件预后呈显著相关，中风后激活下丘脑－脑垂体－肾上腺压力轴线，释放AVP。但由于AVP血浆半衰期短，不足30分钟，难以在体外检测并应用于临床诊断，而和肽素稳定性好，室温下可至少保存7天，易于检测，故和肽素成为国内外研究者的热点，现已作为一种应激状态、心脑血管病的新的重要生物标志物（Swiss Med Wkly，2010年第140卷w13101页；国际心血管病杂志，2010年第37卷第210页；心血管病学进展，2011年第32卷第175页）。

发明内容

本发明的目的是提供分泌抗人和肽素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

本发明的另一目的是提供抗人和肽素单克隆抗体。

本发明的又一目的是提供抗人和肽素单克隆抗体的应用。

一株分泌和肽素的杂交瘤细胞株MCCO1，于2012年12月12日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：C2012189。

所述的保藏号为CCTCC NO：C2012189的杂交瘤细胞株MCCO1分泌的抗人和肽素单克隆抗体mcco1。

所述的保藏号为CCTCC NO：C2012189的杂交瘤细胞株MCCO1分泌的抗人和肽素单克隆抗体mcco1在制备人和肽素的检测试剂中的应用。

所述的人和肽素检测试剂优选检测人和肽素的Western Blot试剂、免疫细胞化学或免疫组织化学试剂。

一种人和肽素检测试剂，包含本发明所述的抗人和肽素单克隆抗体mcco1。

本发明的有益效果：

本发明利用合成人和肽素片段与KLH偶联作为免疫原，经过皮下免疫及脾内免疫、常规细胞融合、筛选及克隆化，获得了一株能够稳定分泌抗人和肽素单克隆抗体的杂交瘤细胞株MCCO1（CCTCC NO：C2012189）。经ELISA、免疫印迹等方法鉴定，该杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体mcco1能够特异性识别和肽素(Sigma公司)，效价高、特异性强，免疫细胞化学结果证明其敏感性优于多克隆抗体（Santa Cruz公司）。

本发明抗人和肽素单克隆抗体mcco1的应用如下：

（1）应用该单克隆抗体可Western Blot检测和肽素抗原。

（2）应用该单克隆抗体进行免疫细胞化学检测培养细胞和肽素蛋白表达。

（3）应用该单克隆抗体进行免疫组化检测组织中和肽素蛋白表达。

本发明确认了所述的抗人和肽素单克隆抗体mcco1在体外用于检测细胞或组织中和肽素的表达；进一步将可用于检测各种体液如血液、血浆、血清及尿液的和肽素的水平，并应用于疾病诊断，如急性心肌梗死，作为临床诊断或辅助诊断的一个标志物。本发明获得的抗人和肽素单克隆抗体mcco1，为和肽素的基础和临床研究提供了有利的工具。

附图说明：

图1为杂交瘤细胞株MCCO1染色体检测。

图2为Western Blot检测mcco1单克隆抗体与Sigma公司和肽素、合成人和肽素及合成和肽素片段多肽的特异性反应，

其中泳道1为Sigma和肽素5μg蛋白＋mcco1单克隆抗体20μg/mL，

泳道2为合成和肽素全长5μg蛋白＋mcco1单克隆抗体20μg/mL，

泳道3为合成和肽素N端多肽5μg＋mcco1单克隆抗体20μg/mL，

泳道4为合成和肽素C端多肽5μg＋mcco1单克隆抗体20μg/mL。

图3为免疫细胞化学利用mcco1单克隆抗体检测培养细胞和肽素蛋白的表达，

其中A为人胃腺癌细胞株BGC823检测结果（左为未加一抗阴性对照，中一抗为Santa Cruz公司抗人和肽素多克隆抗体SC-7811、右一抗为抗人和肽素单克隆抗体mcco1。一抗浓度均为4μg/mL,DAB染色，黄褐色为阳性，mcco1优于SC-7811）。