[发明专利]一种调节细胞内HUWE1表达水平的方法

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白质表达调控领域，具体而言，本发明涉及一种通过调节细胞内BARD1的表达水平来调节细胞内HUWE1的表达水平的方法。

背景技术

乳腺癌是一种常见恶性肿瘤，严重危害女性健康。在中国，乳腺癌的发病率逐年递增，发病年龄提前，死亡率也不断攀升。大约5-10％的乳腺癌为遗传性乳腺癌，其发病具有明显的家族聚集性和遗传倾向；其余大部分为散发性乳腺癌，目前对其发病原因并不明确。

蛋白HUWE1(人源蛋白，含有HECT、UBA和WWE结构域1，NCBI序列登录号为NM_031407.4)是一个包含4374个氨基酸残基的大分子，分子量约500kDa。其编码基因位于染色体Xp11，但在乳腺癌中已检测到其编码基因延伸至染色体Xp11-13上(Xie D，Jauch A，Miller C W，et al.Discovery of over-expressed genes and genetic alterations in breast cancer cells using a combination of suppression subtractive hybridization，multiplex FISH and comparative genomic hybridization[J].Int J Oncol.2002，21(3)：499-507)。其分子C端有一个HECT结构域(与E6-AP羧基端同源，4036-4374aa)，约有350个氨基酸，这个模序最初发现于细胞内泛素E3连接酶E6-AP(E6-相关蛋白)蛋白质中，当E6-AP与致癌的人乳头瘤病毒E6蛋白结合后，这个复合物具有E3泛素连接酶的活性，就能结合并泛素化降解抑癌基因P53(Scheffner M，Huibregtse J M，Vierstra R D，et al.The HPV-16E6and E6-AP complex functions as a ubiquitin-protein ligase in the ubiquitination of p53[J].Cell.1993，75(3)：495-505；Munger K，Howley P M.Human papillomavirus immortalization and transformation functions[J].Virus Res.2002，89(2)：213-228)。HECT结构域中含有半胱氨酸残基，它能够与泛素分子形成硫酯键，对于含有HECT结构域的E3蛋白酶发挥酶活性起到非常重要的作用(Pickart C M.Mechanismsunderlying ubiquitination[J].Annu Rev Biochem.2001，70：503-533；Huang L，Kinnucan E，Wang G，et al.Structure of an E6AP-UbcH7complex：insights into ubiquitination by the E2-E3 enzyme cascade[J].Science.1999，286(5443)：1321-1326)。HECT结构域为酶催化反应区，此结构域内氨基酸的突变如4341位的半胱氨酸(Cys，C)突变为丙氨酸(Ala，A)之后，可以破坏其E3连接酶活性(Zhong Q，Gao W，Du F，et al.Mule/ARF-BP1，a BH3-only E3ubiquitin ligase，catalyzes the polyubiquitination of Mcl-1and regulates apoptosis[J].Cell.2005，121(7)：1085-1095)；此外，HUWE1的N-端具有以下结构域：ARLD1(104-304aa)和ARLD2(424-815aa)结构域，作用还不是很清楚；一个泛素相关结构域(UBA，1318-1354aa)，与蛋白质泛素化途径相关，如DNA损伤蛋白Rad23、Cbl中含有此结构(Hicke L，Dunn R.Regulation of membrane protein transport by ubiquitin and ubiquitin-binding proteins[J].Annu Rev Cell Dev Biol.2003，19：141-172；Buchberger A.From UBA to UBX：new words in the ubiquitin vocabulary[J].Trends Cell Biol.2002，12(5)：216-221)；WWE结构域(1612-1692aa)，被认为是保守的蛋白质相互作用模序；BH3(Bcl-2同源区域3，1972-1994aa)结构域，其序列与抗凋亡蛋白Bcl-2有高度同源性，可能与细胞凋亡有关。