[发明专利]一种双中性蛋白酶分步酶解花生分离蛋白制备花生肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种双中性蛋白酶分步酶解花生分离蛋白制备花生肽的方法。

背景技术

花生是我国重要的油料作物和食用作物，产量和出口量高居世界首位。目前，中国对花生的利用多在食用油脂的提取方面，对花生蛋白的利用较少。花生的蛋白质含量为25％～30％，花生蛋白含有人体必需的八种氨基酸，精氨酸含量高于其它坚果，生物学效价高于大豆。目前国内市场上的花生蛋白产品主要是花生蛋白粉，其一般是作为食品加工中的基础原料。花生蛋白粉存在着不易吸收、生理洁性较差等缺点，所以在花生蛋白粉的基础上，进一步开发和利用这一巨大的潜在蛋白资源生产高附加值产品成了当务之急。

多项研究表明，花生蛋白经蛋白酶水解制备成花生肽后具有多种生理活性，包括抗氧化作用、抗菌作用、降血压作用等。因此，研究花生蛋白粉酶解工艺制备花生肽，可以开发和利用花生蛋白粉这一巨大的潜在蛋白资源，生产高附加值蛋白产品。采用生物酶法在温和条件下对蛋白进行水解，生成的多肽具有很高营养价值。现代营养研究表明，分子量小于1000u的短肤极易被人体吸收利用，而且具有较强的功能活性，这就要求所选用的酶解工艺在保证短肽得率的前提下尽量提高蛋白的水解度。

目前，蛋白水解制备短肽的工艺中，酶解时间一般在360～960min，短肽得率在60％～65％左右，体系水解度在12％～16％左右，且多存在脱盐等繁琐步骤。因此如何简化工艺并在短时间获得高水解度高得率的短肽成为生产工艺中需要解决的一大难题。

发明内容

本发明的目的是提供一种酶解花生分离蛋白制备花生肽的方法。

本发明所提供的制备花生肽的方法，包括下述步骤：

1)将花生分离蛋白粉用水溶解，得到花生分离蛋白溶液，将所述花生分离蛋白溶液置于80～85℃水浴中保持10～15min，使花生分离蛋白高度压缩、紧密的结构松散开，暴露出分子内部的酶作用位点，以利于蛋白酶的结合；

2)将步骤1)处理后的花生分离蛋白溶液取出，待温度降至中性蛋白酶酶解适合的温度后加入中性蛋白酶进行酶解，得到酶解液，记为酶解液1；

3)向所述酶解液1中加入复合蛋白酶，继续进行酶解，得到酶解液2；

4)使所述酶解液2中的中性蛋白酶和复合蛋白酶失活，离心取上清液，即得花生肽的溶液。

其中，步骤1)中所述花生分离蛋白溶液中花生分离蛋白的质量浓度为6～8％，优选质量浓度为8％。

所述花生分离蛋白粉中，蛋白含量不低于90％，脂肪含量不高于1％。

步骤2)中所述中性蛋白酶的加入量为5200～6500U/g蛋白。所述酶解的条件为：酶解温度40～50℃，酶解时间1.5～2.0h；优选酶解的条件为：酶解温度45℃，酶解时间120min。所述酶解在恒温水浴振荡器中进行。

步骤3)中所述复合蛋白酶的加入量为216～648U/g蛋白。所述酶解的条件为：酶解温度40～50℃，酶解时间2.0～2.5h；优选酶解的条件为：酶解温度45℃，酶解时间120min。所述酶解在恒温水浴振荡器中进行。

本发明中所述中性蛋白酶是由枯草芽孢杆菌经发酵提取而得的，属于单一酶类，无特异性酶切位点；所述复合蛋白酶由内切酶和外切酶复合而成。

本发明对中性蛋白酶酶活定义为：酪蛋白底物在特定条件下经酶水解，每分钟产生1μg酪氨酸为一个活力单位，以U表示。

对复合蛋白酶酶活的定义为：酪蛋白底物在特定条件下经酶水解，每分钟产生1μg酪氨酸为一个活力单位，以U表示。

步骤4)中可按照下述方法使所述中性蛋白酶和复合蛋白酶灭活：将酶解液2升温至90～95℃，保持10～20min。

步骤4)中所述离心的条件为4000～4500rpm离心20～30min。

上述方法还包括对步骤4)得到的花生肽的溶液进行干燥的步骤。所述干燥可采用冷冻干燥或喷雾干燥。

本发明提供了一种方法简单、条件温和、制备时间短、花生肽制备成本低，花生肽得率高且纯度高的花生肽的制备方法。所得花生肽的分子量集中分布于1000Da以下；最终水解度达到38.23％，短肽得率达到88.52％，其中分子量小于1000Da占98.88％，并具有较强的ACE抑制活性，其IC₅₀值为0.842mg/ml。

附图说明

图1为本发明中测得的中性蛋白酶加酶量与水解关系曲线图。

图2为本发明中测得的复配酶种类与水解关系曲线图。

图3为本发明中测得的复合蛋白酶加酶量与水解关系曲线图。