[发明专利]利用加热解决酶抑制法检测韭菜和蒜黄中农药残留的方法

权利要求书

1.一种利用加热解决酶抑制法检测韭菜和蒜黄中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留产生假阳性的方法，实施步骤如下：

(1)制备试剂：①pH8.0缓冲液：准确称取磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H₂O)33.92g，磷酸二氢钠(NaH₂PO₄·2H₂O)0.83g，用蒸馏水溶解定容至1000ml，即为pH8.0 0.1mol/L的磷酸缓冲液；②酶溶液：根据丁酰胆碱酯酶(BuChE)的活性情况，用10ml缓冲液溶解，反应前后吸光度差值ΔA₀控制在大于或等于0.4；③底物液：碘化硫代丁酰胆碱(BuTCI)100mg，用10ml缓冲液溶解；④显色剂：二硫代双对基苯甲酸(DTNB)60mg，用10ml缓冲液溶解。

(2)制备样品：称取切碎长度为1.0-1.5cm的韭菜或蒜黄2.0g，放入提取瓶内，加入20ml缓冲液，振荡1-2min，倒出提取液，静置3-5min，取上清液3ml于1支小试管中，在80℃的恒温箱或水浴锅中加热1min，冷却到室温，待用；

(3)对照组处理：于1只提取瓶中加入20ml缓冲液，振荡1-2min，倒出提取液，静置3-5min。于小试管内分别加入50ul酶溶液，3ml提取液，50ul显色剂，在37-38℃的恒温箱中放置30min后，再加入50ul底物液，倒入比色皿中，用分光光度计检测在410nm波长下反应3min后与3min前的吸光度变化值ΔA₀，记录数据；

(4)韭菜或蒜黄处理：于步骤(2)中的1只小试管中加入50ul酶溶液，50ul显色剂，在37-38℃的恒温箱中放置30min后，再加入50ul底物液，倒入比色皿中，用分光光度计检测在410nm波长下反应3min后与3min前的吸光度变化值ΔA₁，记录数据；

(5)检测结果计算：

酶抑制率(％)＝[(ΔA_0-ΔA₁)/ΔA₀]×100

其中，ΔA₀是对照组反应3min的吸光度变化值，ΔA₁是样品组反应3min的吸光度变化值；当韭菜或蒜黄样品提取液对酶的抑制率≥70％时，表示该样品中含有某种有机磷或氨基甲酸酯类农药残留。

2.根据权利要求1的利用加热解决酶抑制法检测韭菜和蒜黄中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的方法，其特征在于，所述步骤(5)韭菜或蒜黄样品提取液对酶的抑制率≥70％时，该样品需要重复检测2次以上，几次重复检测的重现性应在80％以上，方可判定该样品检测呈阳性。

3.根据权利要求1的利用加热解决酶抑制法检测韭菜和蒜黄中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的方法，其特征在于，所述步骤(5)韭菜或蒜黄样品提取液对酶的抑制率≥70％时，阳性结果的样品，可用其他方法进一步确定具体农药品种及含量。

4.根据权利要求1的利用加热解决酶抑制法检测韭菜和蒜黄中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的方法，其特征在于，所述步骤(1)的酶溶液置于-18℃冰箱中保存，缓冲液、底物液、显色剂置于0-5℃冰箱中冷藏保存、备用，保存期不超过两周。