[发明专利]一种抗人CRT 单克隆抗体的重链和轻链可变区

说明书

技术领域

本发明属于抗肿瘤技术领域，涉及一种抗人CRT单克隆抗体，特别涉及一种抗人CRT单克隆抗体（FMMU-CRT-10）的重链和轻链可变区。 

背景技术

恶性肿瘤是危害人类健康的重大疾病，针对其的治疗手段目前仍处于研究和探索阶段。继传统的手术治疗、放疗、化疗和免疫治疗之后，以结合基因工程和蛋白质工程技术为代表的靶向抗体药物治疗正成为治疗肿瘤的新兴研究领域，受到基础医学和临床医学研究领域科研工作者的广泛关注。 

CRT（钙网蛋白）是一种分子量为46kDa的内质网分子伴侣，它不仅存在于内质网中，还分布于细胞胞质区、胞膜表面以及细胞外基质等非内质网结构中，作为一个重要的调节分子参与机体伤口愈合、免疫反应、组织纤维化和肿瘤的发生、发展等生理和病理过程。CRT在白血病、非霍奇金淋巴瘤、膀胱癌、脑癌、卵巢癌、胃癌、肝癌和肺癌等多种肿瘤细胞中广泛表达，且与肿瘤的侵袭性呈正相关（CRT表达水平越高，肿瘤的侵袭性越高）。作为一个促吞噬的信号，CRT可与吞噬细胞表面的受体低密度脂蛋白（LRP）相结合，促使靶细胞被吞噬。CRT能有效地提呈抗原，与抗原肽结合形成抗原提呈复合物。 

有关CRT的抗肿瘤免疫研究表明，pcDNA3-CRT/E7真核表达质粒联合咪喹莫特治疗TC-1肿瘤鼠，可以有效地增强药物的抗肿瘤作用，并延长荷瘤小鼠的生存期；CRT疫苗可以有效地促进巨噬细胞和NK细胞的抗肿瘤作用。 

目前针对CRT的抗体，国内商品化CRT抗体只有多抗，没有单抗。尽管国外公司有针对CRT分子的单抗，如Abcam公司的CRT单抗（货号ab83200），但其只能用于流式细胞术(1:100稀释)检测。 

抗体单体分子是由两条相同的重链（H链）和两条相同的轻链（L链），通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。H链和L链包括氨基端（N）和羧基端（C），靠近N端的可变区（V区）由高变区/互补决定区（HVR/CDR）和骨架区（FR）组成；靠近C端为恒定区（C区）。重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）形成的蛋白质折叠是抗原结合部位，其中的CDR/HVR是抗体与抗原决定基互补结合的部位，C区引发抗原抗体识别后的反应。抗体根据FR/C区不同可分为人源、鼠源等，鼠源性抗体在人体内使用时具有免疫原性，易引起人体的免疫反应，这些免疫反应可引起对鼠源性抗体的清除以及免疫复合物介导的超敏反应。为了克服鼠源性抗体的缺陷，需要构建高亲和力的特异性的嵌合抗体、单链抗体或人源化抗体。 

在构建人源化抗体过程中，采用噬菌体抗体库等技术获得的人源化抗体在使用过程中常常会出现亲和力不高、使用剂量大等问题。为获得具有较高亲和力的人源化抗体，常常需要改造具有良好特异性和亲和力的鼠源性亲本抗体。其常规策略为：克隆鼠源性抗体轻链和重链可变区基因，将可变区基因克隆入相应载体构建相应的基因工程抗体重组DNA，表达基因工程抗体来制备人源化抗体。因此，筛选出特异性分泌高亲和力鼠源性单克隆抗体的杂交瘤细胞克隆，从中克隆出高亲和力抗体的重链和轻链可变区基因，分析其核苷酸和氨基酸序列对进一步构建高亲和力和特异性的人源化基因工程抗体具有决定性的意义。 

发明内容

本发明解决的问题在于提供一种抗人CRT单克隆抗体，包括其核苷酸和氨基酸序列，为构建高亲和力的抗人CRT嵌合或人源化基因工程抗体提供支 持。 

本发明是通过以下技术方案来实现： 

一种抗人CRT单克隆抗体，包括重链和轻链，所述轻链的可变区的3个互补决定区（CDR）序列为： 

CDR1:Met-Thr-Cys-Ser-Ala-Arg-Ser-Ser-Val-Ile-Tyr； 

CDR2：Ser-Ile-Ser； 

CDR3:Gln-Gln-Trp-Ser-Ser-Ser-Pro-Pro-Arg-Arg； 

所述重链的可变区的3个互补决定区（CDR）序列为： 

CDR1:Gly-Tyr-Asn-Phe-Thr-Lys-Tyr-Gly； 

CDR2:Ile-Asn-Thr-Asn-Thr-Gly-Glu-Pro； 

CDR3:Thr-Arg-Leu-Gly-Gly-Tyr-Tyr-Phe-Asp。 

所述的单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。