[发明专利]一株棘孢木霉及其生物制剂和在防治黄瓜疫霉病中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物农药领域，特别涉及一株棘孢木霉及其生物制剂和在防治黄瓜疫霉病中的应用。

背景技术

黄瓜（Cucumis sativas L.）是一种重要的瓜类蔬菜作物，在我国种植广泛，具有极高的经济价值。近年来，随着黄瓜连作和种植面积的扩大，黄瓜疫霉病（Phytophthora melonis Katsura）已成为影响黄瓜生产的限制因子之一。在广东省各市、县（区）调查发现，该病害在全生育期均可发生，为害严重时可导致植株枯死，部分田块发病率高达40%以上，给黄瓜安全生产造成严重威胁。目前，生产上对该病害的控制主要以化学药剂防治为主。

木霉菌（Trichoderma spp.）是一种广谱性的拮抗丝状真菌，有多个木霉种在植物病害生物防治中具有重要的地位。产祝龙等报道了哈茨木霉（T.harzianum）对水稻恶苗病菌的拮抗作用，胡明江等报道了康宁木霉（T.koningii）对大白菜软腐病的防治作用，张海军报道绿色木霉（T.viride）对棉花枯萎病菌有显著的抑菌作用。对于棘孢木霉（Trichoderma asperellum），夏伟等报道了该菌对立枯丝核菌的拮抗机制，Kolombet等报道了该菌对小麦赤霉病的生防作用，庞漫宇等克隆了该菌的木聚糖酶I基因，汤伟等克隆了该菌的几丁质酶基因。Lorito等报道木霉几丁质酶对多种植物病原真菌有拮抗作用，转化到作物中可表现出广谱的抗病性，且其生物防治效果要优于植物、细菌和其他真菌的几丁质酶。

因此，棘孢木霉作为一类重要的自然资源，已引起国内外研究者的广泛关注，具有开发生物农药的潜力。

发明内容

为了克服上述现有技术防治黄瓜疫霉病的缺点与不足，开发棘孢木霉的应用，本发明的首要目的在于提供一株以黄瓜根际微生物为筛选对象，分离得到的对黄瓜疫霉病菌有寄生作用的棘孢木霉，命名为棘孢木霉（Trichoderma asperellum）PD-19，为黄瓜疫霉病的生物防治奠定基础。

本发明另一目的在于提供一种基于上述棘孢木霉制备得到的生物制剂。

本发明再一目的在于提供上述棘孢木霉在防治黄瓜疫霉病中的应用。

本发明的目的通过下述方案实现：

一株棘孢木霉，将其命名为棘孢木霉（Trichoderma asperellum）PD-19，保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），地址：中国武汉武汉大学，保藏号为CCTCC No：M2013113，保藏时间为2013年4月1日。

所述的棘孢木霉在PDA培养基上26～28℃培养，菌落绿色，形成同心环，在同心环上产生稠密的分生孢子，气生菌丝稀少，菌落背面略带浅黄绿色；分生孢子梗形成垫状至球形丛束，初级分枝与主枝呈直角，多数对生，瓶梗瓶状至安瓶状。

一种生物制剂，基于上述棘孢木霉制备得到。

所述的生物制剂由棘孢木霉经液体发酵制备得到，优选包含以下步骤：将棘孢木霉接种至PD液体培养基培养，即可获得生物制剂。

所述PD液体培养基的pH值为7.0。

所述的培养指在26～28℃，摇床震荡速率为180～200rpm下培养2～3d。

上述生物制剂在防治黄瓜疫霉病中的应用。

上述棘孢木霉在防治黄瓜疫霉病中的应用。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及有益效果：

1、本发明得到的棘孢木霉来源于本地黄瓜根际土壤，能适应本地的自然环境；

2、本发明的生物制剂对黄瓜疫霉病菌具有强烈的抑制作用，而且该生物制剂来源环保无毒性，对生态环境影响小；

3、本发明得到的棘孢木霉，培养条件要求低，具有很好的开发应用前景。

附图说明

图1为棘孢木霉在PDA培养基上的单菌落背面图。

图2为棘孢木霉对黄瓜疫霉病菌的抑制作用结果图。

图3为棘孢木霉对黄瓜疫霉病菌的寄生作用测定的结果图。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1：棘孢木霉的分离、纯化和保藏

（1）PDA培养基的配置：称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸0.5h，纱布过滤，再加20g葡萄糖和20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，121℃灭菌20min，分装入培养皿中冷却后贮存备用。

（2）棘孢木霉的分离、纯化：